Luminex xPONENT 4.0 SP1 - Manuel (Page 17)

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Introduction
Laboratory Sink Drains to remove Azide salts » (Centres
de contrôle et de prévention des maladies, Atlanta, USA,
30 avril 1976).
MISE EN GARDE : Le fluide gaine et la solution dans laquelle sont stockées
les billes contiennent du proclin, un agent suceptible de
provoquer une réaction allergique. Munissez-vous d’un
équipement de protection, avec notamment des gants et
des lunettes de sécurité.
Concentration en billes
La concentration en billes d’une analyse détermine la vitesse du système. Si vous utilisez
un kit xMAP, suivez les instructions fournies avec le kit ou respectez le protocole du
logiciel fourni. Luminex recommande généralement d’utiliser entre 2 000 et 5 000 billes
par cible, en fonction de l’analyse.
Mesures répétitives de billes xMAP
Lors d’une analyse xMAP, le signal rapporteur représente le résultat de l’analyse. En
raison de la petite taille des billes, une suspension de billes xMAP présente une cinétique
de la réaction très proche de celle de la phase soluble. Cela signifie que chaque
ensemble de billes xMAP utilisé pour une analyse particulière révélera une répartition
statistiquement égale des molécules rapporteurs liées à la surface de chaque bille. Lors
de l’acquisition de données, de nombreuses billes de chaque ensemble sont analysées
et la moyenne est calculée pour cet ensemble par le logiciel. Par conséquent, plus on
mesure de billes d’un ensemble, plus cette mesure est fiable. Si vous utilisez un kit xMAP,
suivez les instructions fournies avec le kit ou respectez le protocole du logiciel fourni.
Fluorochromes rapporteurs et de classification
Chaque ensemble de billes xMAP est marqué de façon interne par deux colorants
de classification, ou trois colorants pour les billes au-delà de 100 plex. Le signal de
fluorescence de ces colorants permet de classifier chaque ensemble de billes. Dans la
mesure où chaque bille est analysée individuellement, les ensembles peuvent donc être
différenciés selon leurs signaux d’émission, même s’ils sont mélangés dans le cadre
d’une analyse multiplex. Le signal de fluorescence des molécules rapporteurs liées à la
surface de chaque ensemble de billes est mesuré et utilisé pour déterminer le résultat
de chaque analyse dans un multiplex. De même, comme chaque bille est analysée
individuellement, les signaux rapporteurs peuvent être quantifiés précisément pour
chaque ensemble de billes.
Le tableau ci-dessous indique les fluorochromes rapporteurs acceptables, ainsi que leurs
longueurs d’onde d’excitation et d’émission.
TABLEAU 2. Longueurs d’onde des fluorochromes rapporteurs
R-Phycoerythrin Alexa 532
Poids de la formule (Daltons) 240 000 470
Absorbance max (nm) 480, 546, 565 531
Extinction max (M-1cm-1) 1 960 000 83 800