C. méthodologie, D. prétraitement enzymatique bond, E. protocole de coloration par défaut – Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test Manuel d'utilisation
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Leica Biosystems Mode d'emploi du Leica HER2 FISH System - 30 Test TA9217 FR-CE-Rev_D 08/04/2013
filtres pour microscope à fluorescence multi-passe-bande optimisés pour l'utilisation avec
le Leica HER2 FISH System - 30 Test sont disponibles pour la plupart des modèles de
microscopes. Les jeux de filtres recommandés pour le Leica HER2 FISH System - 30
Test sont le double passe-bande DAPI/9-Orange, le double passe-bande DAPI/Vert, le
double passe-bande Vert/Orange(V.2) et le triple passe-bande DAPI/Vert/Orange (V.2).
C. Méthodologie
• Pour pouvoir suivre cette méthodologie, les utilisateurs doivent être correctement
formés à la technique de fluorescence in situ automatisée.
• Chaque coupe de l'essai colorée avec LSI HER2/CEP17 Dual Probe permet la même
analyse cellulaire des signaux HER2 et centromériques du chromosome 17. Un rapport
ultérieur de signaux de HER2 par rapport à ceux du chromosome 17 permettra d'attribuer
une valeur quantitative à l'échantillon, indiquant un résultat négatif (non-amplifié) ou
positif (amplifié). Les résultats équivoques (limite), compris entre 1,8 et 2,2, doivent être
interprétés avec prudence. Compter 20 noyaux additionnels et recalculer le rapport.
D. Prétraitement enzymatique BOND
Avant la coloration, diluer le Leica BOND Enzyme Concentrate 2 fourni avec une dilution
au 1/300 en utilisant le Leica BOND Enzyme Diluent fourni dans l'un des Leica BOND
Open Containers fournis. Par exemple : pour colorer 10 lames, préparer 3 ml de solution
enzymatique de travail en diluant 10 µl de Leica BOND Enzyme Concentrate 2 dans
2 990 µl de Leica BOND Enzyme Diluent. Il est recommandé de préparer l'enzyme peu de
temps avant chaque cycle de coloration et d'utiliser un volume minimum de 900 µl par cycle.
E. Protocole de coloration par défaut
Il est recommandé d'utiliser le Leica HER2 FISH System - 30 Test avec le protocole de
coloration par défaut recommandé qui figure dans le Tableau 2 ci-dessous.
Type de protocole
Nom du protocole
Coloration
*FISH Protocol A
Préparation
*Dewax
HIER
*HIER 25 min with ER1 (97)
Enzyme
*Enzyme 5 for 25 min
Dénaturation
*D10
Hybridation
*ISH Hybridization (12Hr)
Tableau 2 : Leica HER2 FISH System - 30 Test Staining Protocol par défaut