Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test - Manuel (Page 14)

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Leica Biosystems Mode d'emploi du Leica HER2 FISH System - 30 Test TA9217 FR-CE-Rev_D 08/04/2013
Contrôle de qualité
Utilisation des lames de contrôle
Il est recommandé d'inclure une Leica HER2 FISH Control Slide à chaque exécution du test
pour contrôler la performance de l'analyse et évaluer l'exactitude de l'énumération des signaux.
Les lames de contrôle doivent être utilisées pour chaque lot de coloration sur le Leica BOND-
MAX and BOND-III System et avec chaque nouveau lot de réactifs. De plus, les utilisateurs
individuels peuvent choisir d'utiliser leur propre matériau de contrôle.
Évaluer la qualité des lames de contrôle et faire l'énumération des signaux en fonction des
instructions figurant à la section Évaluation des signaux et énumération. Les critères de
qualité des lames doivent être remplis et les résultats du rapport HER2/CEP17 doivent être
dans les plages établies pour une performance acceptable du test. Pour connaître les critères
d'acceptation des Leica HER2 FISH Control Slides, voir le Tableau 3.
Lignée
cellulaire Profil du
Bond Oracle
HER2 IHC
System Charge du
récepteur
HER2 par
cellule* Leica HER2 FISH System - 30 Test
Critères d'acceptation HER2/CEP17
SKBr-3 3+ 4,3 x 10 5 L'amplification HER2 est observée
MDA-MB-453 2+ 1,4 x 10 5
Le rapport génique HER2/CEP17 doit être
compris entre 1,5 et 2,5
MDA-MB-175 1+ 6,3 x 10 4 L'amplification HER2 n'est pas observée
MDA-MB-231 0 9,3 x 10 3 L'amplification HER2 n'est pas observée
*Analyse de la charge du récepteur HER2, telle que déterminée par la cytométrie en flux
Tableau 3 : Interprétation de Leica HER2 FISH Control Slide
En cas d'échec des contrôles, il faut exclure du rapport les résultats FISH pour le cas
correspondant. Si les lames de contrôle ne satisfont pas aux critères d'acceptation des lames,
cela peut signifier un fonctionnement inadéquat du Leica HER2 FISH System - 30 Test. Dans ce
cas, il est nécessaire de répéter le test avec de nouvelles lames de contrôle et la ou les lames
portant les échantillons du patient. Si les résultats sont hors de la plage spécifiée, alors que les
lames de contrôle satisfont aux critères d'acceptation concernant la qualité, il peut être approprié
de répéter l'examen de dépistage de cette même lame car il se peut que l'énumération ne soit
pas correcte. Consulter le guide de dépannage (Tableau 6) en cas d'échec d'hybridation, en
utilisant soit la ou les lames portant l'échantillon, soit la ou les lames de contrôle.
Pour les échantillons cliniques, quand il est difficile d'interpréter le signal d'hybridation et qu'il n'y
a pas assez d'échantillons pour recommencer le test, le test n'a aucune valeur d'information. Si
les cellules à analyser sont en nombre insuffisant, le test n'a aucune valeur d'information.
Les échantillons du patient doivent être contrôlés conformément aux procédures opératoires
standard du laboratoire. La qualité des signaux et les résultats de l'énumération doivent être
documentés sur un formulaire de rapport approprié.
Restrictions
A. Restrictions générales
La technique FISH requiert une formation spéciale pour tous les aspects de la procédure (incluant
la sélection des réactifs appropriés, du tissu, la fixation, le traitement et la préparation de la lame) et
de l'interprétation. La coloration du tissu dépend de la manipulation, de la fixation et du traitement du
tissu avant la coloration. Une fixation, une congélation, une décongélation, un lavage, un séchage,
un chauffage, une coupe incorrects ou une contamination avec d'autres tissus ou fluides risquent de
produire des artefacts morphologiques, une dégradation d'acides nucléiques, une fluorescence de fond
ou des résultats faussement négatifs. Des résultats incohérents peuvent être dus à des variations des
méthodes de fixation, d'enrobage, ou à des irrégularités inhérentes au tissu (21). Une contre-coloration