Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test - Manuel (Page 5)

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Leica Biosystems Mode d'emploi du Leica HER2 FISH System - 30 Test TA9217 FR-CE-Rev_D 08/04/2013
Principe de la procédure
Le Leica HER2 FISH System - 30 Test est doté des composants requis pour exécuter une
procédure de coloration basée sur l'hybridation fluorescente in situ pour des tissus fixés au formol
et enrobés de paraffine. Après un prétraitement approprié, une incubation avec le LSI HER2/
CEP17 Dual Probe prêt à l'emploi et un lavage de stringence approprié, les coupes tissulaires
sont déshydratées et montées avec du DAPI. Les résultats sont interprétés par microscopie à
fluorescence en utilisant les filtres recommandés aux longueurs d'onde appropriées.
Le Leica HER2 FISH System - 30 Test ne doit être utilisé que sur le Leica BOND-MAX and
BOND-III System.
Composants fournis
Les matériaux cités ci-dessous (Tableau 1) sont suffisants pour colorer 30 tests (30 lames
colorées avec LSI HER2/CEP17 Dual Probe).
LSI HER2/CEP17 Probe
6,6 ml
Contient LSI HER2/CEP17 Dual Probe prêt à l'emploi.
Contient <60% (v/v) de formamide.
Post Hybridization Wash 2
9 ml
Contient la solution de lavage post-hydridation prête à l'emploi.
Contient <50% (v/v) de formamide.
Leica BOND Enzyme
Concentrate 2
1 ml
Contient la solution de protéinase K à 1,7 mg/ml.
Leica BOND Enzyme Diluent
65 ml
Contient un diluant enzymatique.
Leica BOND Open Container
3 x 7 ml BOND Open Container gebruikt voor Enzyme 5.
Tableau 1 : composants du Leica HER2 FISH System - 30 Test
Consulter les fiches signalétiques individuelles pour les informations de sécurité du produit,
disponibles à l'adresse www.LeicaBiosystems.com/TA9217
Instructions d'utilisation
Tous les réactifs fournis sont préparés pour être utilisés avec ce test et les numéros de lot
attribués sont spécifiques à chaque Leica HER2 FISH System - 30 Test. Pour que le test soit
valable, il ne faut rien remplacer.
Stockage et stabilité
Stocker entre 2 et 8 °C. Ne pas congeler. Replacer à une température comprise entre 2 et
8 °C immédiatement après utilisation. Le non-respect de ces conditions entraîne l'invalidité du
test. Vérifier que la date de péremption du Leica HER2 FISH System - 30 Test utilisé n'est pas
dépassée. Les signes indiquant une contamination et/ou une instabilité du Leica HER2 FISH
System - 30 Test sont la turbidité des solutions (à l'exception de la solution de la sonde) et le
développement d'odeur. L'utilisateur doit vérifier les conditions de stockage autres que celles
spécifiées ci-dessus.
Préparation des échantillons
Il faut utiliser des méthodes de traitement standard des tissus pour tous les échantillons (19).
Il est recommandé de préparer les tissus dans des fixateurs à base de formol, de les traiter de
façon routinière et de les enrober à la paraffine. Par exemple, les échantillons doivent avoir une
épaisseur de 3 à 4 mm et être fixés pendant 18 à 24 heures dans du formol neutre tamponné
à 10%. Les tissus doivent ensuite être déshydratés dans de l'alcool, puis éclaircis au xylène, et
enfin imprégnés de paraffine liquide et maintenus à une température ne dépassant pas 60 °C.
Les échantillons tissulaires doivent être coupés à une épaisseur de 4 à 6 µm.