Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test - Manuel (Page 21)

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Leica Biosystems Mode d'emploi du Leica HER2 FISH System - 30 Test TA9217 FR-CE-Rev_D 08/04/2013
et la température du lavage de stringence. Des études de robustesse portant sur la température
et l’humidité et utilisant le protocole par défaut du Leica BOND-MAX and BOND-III System ont
également été menées hors des limites recommandées, selon les indications du guide FDA/
ORA intitulé ORA LAB5.3 Rev1.7.
• Aucune différence dans le statut d’amplification n’a été observée quand la température par
défaut pour chaque étape dépendante de la chaleur a été élevée de 4 °C ou abaissée
de 4 °C, en comparaison du protocole par défaut du Leica HER2 FISH System - 30 Test.
Des résultats de très haute qualité ont été observés aux températures par défaut et ces
températures sont recommandées.
• Aucune différence dans le statut d’amplification n’a été observée quand le temps de
restauration de l’épitope (HIER) induite par la chaleur a été de 20 minutes et 30 minutes à
97 °C avec la solution Leica BOND ER1, en comparaison du protocole par défaut du Leica
HER2 FISH System - 30 Test. Des résultats de qualité supérieure ont été observés au temps
par défaut de 25 minutes et ce temps d’incubation est recommandé.
• Aucune différence dans le statut d’amplification n’a été observée quand le temps de
restauration de l’épitope induite par les enzymes (EIER) a été de 15 minutes et 35 minutes à
37 °C, en comparaison du protocole par défaut du Leica HER2 FISH System - 30 Test. Des
résultats de qualité supérieure ont été observés au temps par défaut de 25 minutes et ce
temps d’incubation est recommandé.
• Aucune différence dans le statut d’amplification n’a été observée quand la concentration
enzymatique de la restauration de l’épitope induite par les enzymes (EIER) a été effectuée
avec des proportions concentré enzymatique/diluant enzymatique de 1/200 et 1/500 en
utilisant le protocole par défaut du Leica HER2 FISH System - 30 Test protocol. Des résultats
de qualité supérieure ont été observés avec la concentration par défaut de 1/300 et cette
dilution est recommandée.
• Aucune différence dans le statut d’amplification n’a été observée quand le temps de
dénaturation a été de 5 minutes et 15 minutes, en comparaison du protocole par défaut du
Leica HER2 FISH System - 30 Test. Des résultats de très haute qualité ont été observés au
temps par défaut de 10 minutes et ce temps de dénaturation est recommandé.
• Aucune différence dans le statut d’amplification n’a été observée quand le temps d’hybridation
a été de 9 heures et 15 heures, en comparaison du protocole par défaut du Leica HER2
FISH System - 30 Test. Des résultats de qualité supérieure ont été observés au temps par
défaut de 12 heures et ce temps d’hybridation est recommandé.
• Aucune différence dans le statut d’amplification n’a été observée quand le temps de lavage
post-hybridation a été de 2 minutes, 5 minutes et 7 minutes, en comparaison du protocole
par défaut du Leica HER2 FISH System - 30 Test . Des résultats de qualité supérieure ont
été observés au temps par défaut de 4 minutes et ce temps de lavage post-hybridation est
recommandé.
• Aucune différence dans le statut d’amplification n’a été observée quand le Leica HER2 FISH
System - 30 Test a fonctionné à 28 °C et 30 % d’humidité relative, et à 16 °C et 80 %
d’humidité relative, en comparaison du protocole par défaut du Leica HER2 FISH System -
30 Test effectué dans des conditions ambiantes.
Les opérations réalisées hors des paramètres testés pour la robustesse du test et recommandés
n’ont pas été validées. L’utilisation de tout autre paramètre de contrôle peut invalider le test.
Le texte ci-dessus décrit les conditions testées et les résultats de l’étude. Veuillez noter que
Leica n’a pas testé toutes les combinaisons de conditions possibles et ne recommande pas
l’utilisation de plages hors limites pour toute condition. Le protocole par défaut du Leica HER2
FISH Staining Protocol est résumé dans le tableau 2.