Leica Biosystems Bond Oracle HER2 IHC System - Manuel (Page 14)

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Leica Biosystems Bond Oracle HER2 IHC System Instructions for Use TA9145 FR-CE-Rev_E 18/06/2013
• Présence d'une coloration brune très faible/à peine visible et incomplète de la membrane
cellulaire dans la lignée cellulaire de contrôle 1+, MDA-MB-175.
• Pas de coloration dans la lignée cellulaire de contrôle 0, MDA-MB-231.
Remarque importante : La lignée cellulaire de contrôle 1+, MDA-MB-175, se caractérise par un
modèle de croissance distinct dans lequel les cellules forment des agrégats. Ces agrégats
font apparaître une zone de bordure en brosse luminale continue dans l'amas cellulaire.
La coloration de cette bordure en brosse est plus forte que pour le reste de la membrane
cellulaire. La coloration très faible/à peine visible et incomplète de la membrane cellulaire est
le schéma de coloration correct de l'oncoprotéine HER2 (1+). L'immunocoloration à points
de la région de Golgi dans le cytoplasme peut également être observée dans cette lignée
cellulaire.
2. Contrôle tissulaire positif interne – HER2 Primary Antibody
La PRÉSENCE d'une coloration brune de la membrane doit être observée en fonction du
statut de l'oncoprotéine HER2 connue du contrôle positif choisi.
3. Composant tissulaire de contrôle négatif interne – HER2 Positive Control
L'ABSENCE de coloration de la membrane doit être observée. Un composant tissulaire de
contrôle négatif confirme le manque de réactivité croisée du système de détection face aux
cellules/composants cellulaires cibles spécifiques. En cas de coloration de la membrane
dans un composant tissulaire de contrôle négatif, l'échantillon du patient doit être considéré
comme non valide.
4. Tissu du patient – coloration via HER2 Negative Control
L'ABSENCE de coloration de la membrane vérifie l'étiquetage spécifique de l'antigène cible
par l'anticorps primaire. Toute autre coloration brune apparaissant dans le cytoplasme de
l'échantillon traité avec le HER2 Negative Control, comme dans un tissu conjonctif, des
leucocytes, des érythrocytes ou dans un tissu nécrotique, doit être considérée comme une
coloration de fond non spécifique et doit être notée.
5. Tissu du patient – coloré via l'HER2 Primary Antibody
Les niveaux d'expression de l'oncoprotéine HER2 sont déterminés par les critères définis
à la fois dans le tableau 4 et dans le Bond Oracle HER2 IHC System Interpretation Guide.
Restrictions
A. Restrictions générales
L'immunohistochimie est une technique de laboratoire multi-étapes permettant d'interpréter
et de déterminer les caractéristiques histopathologiques. Cette technique requiert une
formation spéciale pour tous les aspects de la procédure (y compris la sélection des réactifs
appropriés, du tissu, de la fixation, du traitement et de la préparation de la lame IHC) et de
l'interprétation.
La coloration immunohistochimique du tissu dépend de la manipulation, de la fixation et du
traitement du tissu avant la coloration. Une fixation, une congélation, une décongélation,
un lavage, un séchage, un chauffage, une coupe incorrects ou une contamination avec
d'autres tissus ou fluides risquent de produire un artéfact, un piégeage de l'anticorps ou
des résultats faussement négatifs. Des résultats non homogènes peuvent provenir des
variations des méthodes de fixation, d'enrobage, ou à des irrégularités inhérentes au tissu
(15). Une coloration de contraste excessive ou incomplète peut également compromettre
l'interprétation correcte des résultats.
En cas de coloration non spécifique, celle-ci a généralement une apparence diffuse. La
coloration sporadique des tissus conjonctifs s'observe également dans les sections
des tissus ayant subi une fixation au formol excessive. Utiliser des cellules intactes pour
l'interprétation des résultats de coloration. Les cellules nécrotiques ou dégénérées font