Gel recettes – Hoefer SE400 Manuel d'utilisation
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Gel recettes
Les recettes de gel Laemmli sont pour 30 ml d’une solution de concentration unique (assez
pour un 1,5 de 18 mm × 16 cm de gel). Sous forme de tableau sont des ingrédients et des
volumes pour des gels pores relativement grands (7,5 à 10% de la plage T) ainsi que les
petites gels pores (de 12,5 à 15% de la plage T). Un gel à 4% d’empilage est commun. La
recette est dégradé linéaire de 100 ml de solution. Le volume total nécessaire dépend du
nombre de suffrages gels et de l’épaisseur du gel; ajuster si nécessaire. Tous les gels sont
réticulées avec 2,6% C.
Tableau 5. Laemmli recettes de gel (par une solution à 30 ml de gel résoudre, 5 ml de solution
de gel d’empilement)
gel de résolution
empilement de gel
7,5%
10%
12,5%
15%
4%
Stock de l’acrylamide (Solution #1) 7,5 ml
10 ml
12,5 ml
15 ml
0,67 ml
1,5 M TrisCl, pH 8,8 Solution #2) 7,5 ml
7,5 ml
7,5 ml
7,5 ml
0,5 M TrisCl, pH 6,8 (Solution #3)
1,25 ml
10% SDS (Solution #4)
0,3 ml
0,3 ml
0,3 ml
0,3 ml
0,05 ml
Désionisée H
2
O
14,6 ml
12,1 ml
9,6 ml
7,1 ml
3,00 ml
10% APS (Solution #5)
150 µl
150 µl
150 µl
150 µl
25 µl
TEMED
10 µl
10 µl
10 µl
10 µl
2,5 µl
Volume final
30,0
30,0 ml
30,0 ml
30,0 ml
5,0 ml
Pour les gels de gradient linéaire, utilisez des volumes égaux de% basse et haute des
solutions% d’acrylamide. APS moins est ajouté à prolonger le temps de polymérisation,
et moins encore est ajouté à la solution T supérieur% pour permettre la polymérisation
de se produire à partir du haut vers le bas. Dans notre expérience avec les concentrations
dans l’exemple ci-dessous gradient 10-20%, dix sandwichs de gel peut être coulé dans un
lanceur multiple gel à un débit de 5-10 ml / min.
Tableau 6. Linéaires recettes de gel de gradient (par 100 ml de solution)
10% T
20% T
Stock de l’acrylamide (Solution #1)
33,30 ml
66,70 ml
Saccharose
—
15,00 g
1,5 M TrisCl, pH 8,8 (Solution #2)
25,00 ml
25,00 ml
10% SDS (Solution #4)
1,00 ml
1,00 ml
Désionisée H
2
O
à 100,00 ml
à 100,00 ml
10% APS (Solution #5)
0,300 ml
0,060 ml
TEMED
0,036 ml
0,036 ml