Hoefer SE400 - Manuel (Page 19)

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2.2 Préparation du gel d’acrylamide
Tableau 1. Approximative volume de la solution
monomère requis pour un seul gel
Gel épaisseur (mm)
Modèle 0,75 1,00 1,5
SE400 15 ml 23 ml 30 ml
SE410 23 ml 34 ml 45 ml
2.2.1 gel de résolution
1
Préparer la solution de monomère et versez le gel.
Préparer la quantité nécessaire de la solution
monomère, désaérer, et ajouter l’initiateur et un
catalyseur juste avant la coulée du gel.
2
Pipeter la solution dans un coin du sandwich, en
prenant soin de ne pas introduire de bulles d’air. Voir
ci-dessous pour le niveau de la solution appropriée:
Pas de gel d’empilement (système continu). Remplir
solution à juste en dessous de la partie supérieure du
bord de plaque supérieure. Si des bulles sont empris-
onnées, les retirer avec une pipette ou une seringue.
Mettre en place un peigne (avec un léger angle) dans
chaque sandwich, en prenant soin de ne pas emprison-
ner des bulles d’air sous les dents.
2-gel de sandwich. Pipette la solution dans les deux
sandwichs, le remplissage de chaque au même niveau
en dessous du bord cranté.
Empilable sur gel. Remplissez solution à 3-4 cm en
dessous du haut de la plaque de verre. Cette hauteur
permet 1 cm de gel d’empilement ci-dessous les
puits. Verser le gel et appliquer une superposition
(voir étape 3). Après le gel est fixé, de préparer le gel
d’empilement comme décrit dans la section suivante.
Électrophorèse 2-D (système discontinu). Pour la seconde
dimension gel de résolution, remplir solution à ~1,0
cm en dessous du haut de la plaque de verre (laisser
un espace supplémentaire pour un gel d’empilement, si
nécessaire). Un centimètre permet suffisamment d’espace
pour la bande IPG première dimension ou d’un gel tube
et un joint d’agarose. (Pendant le transfert, prendre soin
d’éviter d’emprisonner l’air entre le gel en tube et plaque
de gel; sceller le tube de gel en place avec de l’agarose
dans un tampon d’électrophorèse.)
Remarque: L’annexe A à
la page 30, énumère les
recettes pour le système de
gel de Laemmli.