Hoefer SE400 - Manuel (Page 40)

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6. Résoudre un gel de superposition
(0,375 M TrisCl, 0,1% SDS, pH 8,8, 100 ml)
1,5 M Tris-Cl, pH 8,8 (Solution #2) 0,375 M 25,0 ml
10% SDS (Solution #4)
3,5 mm 1,0 ml
Désionisée H
2
O à 100,0 ml
Stockez jusqu’à 3 mois à 4 °C dans l’obscurité.
-ou-
De l’eau saturée en n-butanol
Agiter le n-butanol et désionisée H
2
O dans une
ampoule à décanter. Retirez le aqueuse (inférieure) de
phase. Répétez cette procédure plusieurs fois. Utilisez
la phase supérieure.
-ou-
Si un recouvrement interfère avec le protocole préféré,
isoler le gel de l’oxygène atmosphérique en plaçant un
peigne préparative ou gel de résolution sur le gel ex.
7. 2X tampon traitement de l’échantillon
(0,125 M TrisCl, 4% SDS, 20% glycérol,
0,2 mM DTT*, pH 6,8, 10 ml)
0,5 M Tris Cl, pH 6,8 (Solution #3) 0,125 M 2,5 ml
10% SDS, 0,35 M (Solution #4)
0,14 M 4,0 ml
Glycérol (FW 92,09) 20% v/v 2,0 ml
Dithiothreitol (DTT) (FW 154,2) 0,2 mM 0,31 g
Bleu de bromophénol (FW 691,9) 0,3 mM 2,0 mg
Désionisée H
2
O à 10,0 ml
* ou 2-mercaptoethanol (FW 78,13) 2% v/v 0,2 ml
Diviser en parties aliquotes 1,0 ml et conserver à -40 °C à
-80 °C pour un maximum de 6 mois.
-ou-
6X tampon traitement de l’échantillon
(0,35 M TrisCl, 10% SDS, 30% glycérol, 9,3% DTT,
pH 6,8, ~10 ml)
0,5 M TrisCl, pH 6,8 (Solution #3) 0,35 M 7,0 ml
SDS (FW 288,4) 0,35 M 1,0 g
Glycérol (FW 92,09) 30% v/v 3,0 ml
DTT (FW 154,2) 0,6 M 0,93 g
Bleu de bromophénol (FW 691,9) 0,175 mm 1,2 mg
Diviser en parties aliquotes 1,0 ml et conserver à -70 °C.