Hoefer SE400 - Manuel (Page 23)

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2.3 La préparation des échantillons
La quantité d’échantillon chargé dépend de
l’épaisseur du gel, la sensibilité de la méthode
de détection utilisée, et la quantité d’échantillon
prévu dans chaque bande. Dans un système
tampon continu, l’échantillon de protéine doit
être relativement concentré parce qu’aucun
gel d’empilement est utilisé. Dans un système
tampon discontinu, la zone dans laquelle chaque
espèce moléculaire migre est aiguisée par le gel
d’empilement, de sorte de l’échantillon n’a pas
besoin d’être aussi concentrés.
1
Préparer les puits. Retirer le peigne en secouant déli-
catement un côté à côté et puis en le soulevant vers
le haut pour éviter d’endommager les parois du puits.
Rincer soigneusement chaque puits avec du tampon
d’électrophorèse pour éliminer l’acrylamide non poly-
mérisée et puis les égoutter en inversant le sandwich
de gel (ou roulette). Remplir chaque puits avec du
tampon d’électrophorèse.
2
Préparer l’échantillon. Augmenter la densité échantil-
lon de liquide avec 10% de glycérol ou de saccharose.
Ajouter un colorant de suivi telles que le rouge de
phénol, bleu de bromophénol, ou pyronine Y.
Pour les gels de protéines de la SDD, utilisez un
tampon de traitement 2X pour dénaturer les deux
échantillons liquides et secs dans un tube à essai:
Pour les échantillons de protéines liquides, ajouter un
volume égal de tampon de traitement 2X.
Pour sécher les échantillons de protéines, ajouter des
volumes égaux de tampon de traitement 2X et d’eau
déminéralisée pour atteindre la concentration souhaitée.
Chauffer le tube dans l’eau bouillante pendant 90
secondes, puis laisser refroidir à température ambi-
ante. Échantillons traités peuvent être stockés à -40 à
-80 °C pour les courses futures.
Protéines membranaires de chaleur à 60 °C pendant
20 minutes. Conserver l’échantillon utilisé à 4 °C.
Tableau 2. Eh bien le volume
(µl) par une profondeur de
1 mm pour chaque taille de
peigne
épaisseur de peigne
(mm)
Nombre
de puits 0,75 1,0 1,5
10 6,2 8,3 12,4
12 5,8 7,7 11,5
15 4,3 5,7 8,6
20 3,1 4,1 6,2
28 2,1 2,7 4,1