Hoefer SE400 - Manuel (Page 38)

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Annexe A. Laemmli système gels
Tableau 4. Gels Laemmli - concentrations finales
tampon
gel de résolution empilement de gel d’électrophorèse
Acrylamide conc. 10% T*, 2,6% C 4% T, 2,6% C
Tris-Cl 0,375 M 0,125 M
Tris-Glycine 0,025 M Tris base
0,192 M glycine
pH 8,8 6,8 ~8,3
SDS 0,1% 0,1% 0,1%
APS † 0,05% w/v 0,05 – 0,1% w/v
TEMED ‡ 0,05% v/v 0,05 – 0,1% v/v
* Pour atteindre une autre concentration finale désirée, ajuster les
volumes d’achat d’actions d’acrylamide et de l’eau. Les volumes pour
les différentes concentrations sont indiquées dans le tableau 5.
† Persulfate d’ammonium.
‡ Tétraméthyléthylènediamine
Le système de Laemmli est le protocole le plus
courant pour électrophorèse SDS-dénaturées proté-
ines. L’ion conduisant dans ce système tampon
discontinue est le chlorure et l’ion de fuite est la
glycine. Par conséquent, le gel de résolution et le
gel d’empilement contiennent Tris-Cl tampons (de
la concentration différente et pH), et le tampon
d’électrophorèse contient du Tris-glycine. Tous les
tampons contiennent 0,1% de SDS.
Composition de gel de polyacrylamide est indiqué par
deux pourcentages différents:
Le pour cent total de l’acrylamide (% T) dans le gel
de résolution, qui peut varier de 4 à 20%, déter-
mine la taille des pores. Couramment, la quantité de
réticulant utilisé (% C) est de 2,6%. Dans le système
suivant exemple, la composition de gel de résolu-
tion est de 10% T, 2,6% de C, qui se traduit par
une taille de pore moyenne. La composition de gel
d’empilement est T 4%, 2,6% de C. Le T% dans le
gel d’empilement est inférieur à cause une taille plus
grande est requise des pores.
Attention! L’acrylamide est une
neurotoxine. Toujours porter des
gants lorsque vous manipulez,
sous quelque forme et porter
un masque tout en pesant
la poudre. Jamais la bouche
pipeter la solution.
g(bisacrylamide)
g(acrylamide + bisacrylamide)
%C = × 100
g(acrylamide + bisacrylamide)
100 ml
%T = × 100