Hoefer SE400 - Manuel (Page 21)

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2.2.3 Gels de gradient
Des gels à gradient linéaire peut être versé
dans la coulée de gel. Pour gradient facile de
mélange, nous recommandons d’utiliser l’un
des responsables SG Hoefer gradient de la série.
Des gels de gradient sont versés à partir du haut
de la roulette avec une canule si vous utilisez la
roulette de gel fourni ou à partir du bas si vous
utilisez une roulette Hoefer gel multiples (voir les
instructions accompagnant le lanceur de sorts).
Une fois que le gel de gradient polymérise, un gel
d’empilement est versé.
1
Assembler le plateau de verre dans le lanceur de sorts
tel que décrit dans la section 2.1.2.
2
Mettre en place le chemin d’écoulement monomère
solution. Exécuter une longueur de tube en vinyle
transparent à travers une pompe péristaltique.
Attacher une extrémité de la tubulure à l’orifice de
sortie de gradient machine et l’autre extrémité à une
canule 20 cm. (La diamètre extérieur de la canule
doit être inférieure à l’épaisseur d’espacement.)
Placer la canule de sorte qu’il repose au fond du
sandwich, à mi-chemin entre les entretoises.
3
Préparer la solution de monomère. Calculer le volume
total nécessaire. Préparer la moitié de ce volume de
plus et l’autre moitié de la solution% inférieure acryl-
amide. (Facultatif: Ajouter 15% de saccharose ou de
glycérol 25% [concentration finale] à la solution% de
plus pour améliorer la superposition.)
Remarque: Avec Coomassie ™
Blue, il est possible de détecter
1 µg dans une seule bande.
Avec les taches d’argent les
plus sensibles, il est possible de
détecter aussi peu que 10 ng.
Fig 6. Verser un gel de gradient.