Hoefer SE640 - Manuel (Page 29)

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Temps
Un exécution est terminée lorsque le colorant suivi
atteigne le fond du gel. A 1,5 mm d’épaisseur
Laemmli SDS sur gel, exécutez à 25 mA/gel sans
refroidissement, nécessite habituellement 2,5 heures.
Paramètres d’électrophorèse pour ADN /
acrylamide des gels
Gels d’ADN sont généralement gérés à un réglage de
tension constante, et depuis des systèmes tampons
sont continues, les deux lectures de courant et tension
reste constante tout au long de la course. Conditions
de course sont exprimés en unités de V/cm. Publié
conditions de fonctionnement varient considérablement,
mais les tensions dans la gamme de 1 à 3 V/cm sont
communs pour les courses de nuit.
Enregistrez chaque course
Gardez une trace de ce paramètre, le numéro courant
ou de tension et de l’épaisseur de gels, système de
mémoire tampon, et les lectures initiale et finale
courant ou de tension pour chaque course de sorte
que les résultats puissent être comparés. Des résultats
incohérents pour le même système et les paramètres
indiquent des problèmes potentiels tels que les fuites
de courant, des concentrations de tampon incorrectes,
fortes concentrations de sel ou de la qualité chimique
incompatible.
Contrôler la progression du groupe après 5 minutes, et
de nouveau après une heure, en gardant un œil sur le
taux de migration du colorant de suivi. L’exécution est
terminée lorsque le colorant suivi atteigne le fond du
gel. Surveiller le niveau du tampon et, si nécessaire,
reconstituer comme nécessaire pour maintenir
l’électrode supérieure immergée. (Un petit volume de
tampon peut fuir devant une plaque entaillée ou joint,
ou un tampon peut passer à travers le gel.) Attention! Après de surveillance
initiale, ne laissez pas l’appareil
sans surveillance pendant plus
de 1 h avant de vérifier l’état
d’avancement des bandes et le
niveau de tampon.