Hoefer SE640 - Manuel (Page 19)

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Des gels d’acrylamide
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Préparer la solution de monomère et versez le gel
Préparer la quantité requise de solution de monomère.
Désaérer et ajouter l’initiateur et un catalyseur juste
avant la coulée du gel. Introduire à la pipette la solu-
tion dans un coin du sandwich, en prenant soin de
ne pas introduire de bulles d’air. Voir ci-dessous pour
le niveau de la solution appropriée en fonction de
l’application.
Pas de gel d’empilement (système continu). Remplir
solution à juste en dessous de la partie supérieure du
bord de plaque supérieure. Si des bulles sont empris-
onnées, les retirer avec une pipette ou une seringue.
Mettre en place un peigne (avec un léger angle) dans
chaque sandwich, en prenant soin de ne pas empris-
onner des bulles d’air sous les dents.
Club sandwich. Pipeter la solution dans les deux sand-
wichs, le remplissage de chaque au même niveau en
dessous du bord cranté.
Empilement de gel. Remplir solution à 3–4 cm en des-
sous du haut de la plaque de verre. Cette hauteur
permet 1 cm de gel d’empilement ci-dessous les
puits. Verser le gel et appliquer une superposition
(voir étape 2). Après le gel est fixé, de préparer le gel
d’empilement comme décrit ci-dessous.
Électrophorèse 2-D (système de la protéine discon-
tinue). Remplir solution de monomère à environ 1 cm
en dessous du haut de la plaque de verre pour per-
mettre 4–5 mm pour la bande ou de gel IPG tube et
un joint d’agarose. (Un gel de concentration, il faudra
un espace supplémentaire). Sceller la bande IPG ou
de gel tube en place avec de l’agarose dissous dans
la gestion de mémoire tampon. Prenez soin d’éviter le
piégeage des bulles d’air entre les gels de première et
de deuxième dimension.