Hoefer TE42 - Manuel (Page 30)

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Transferts d’acides nucléiques
Les acides nucléiques doit normalement être
transféré sous forme dénaturée de la liaison la
plus efficace. L’ARN est normalement dénaturé
avec du glyoxal avant la séparation ou séparés
dans des gels dénaturants contenant du formal-
déhyde ou du mercure de méthyle. Toutefois,
ADN double brin est généralement dénaturé
dans le gel avec du NaOH. L’alcali doit être
neutralisé et le gel équilibrée dans le tampon de
transfert avant électrotransfert. Pour les deux
ADN et l’ARN gels, toute SDS doit également
être supprimé pour assurer une liaison efficace.
Bittner et al. (1980) de lavage gélifie trois fois,
20 minutes chacun, d’assurer l’élimination
complète de dénaturants et détergents.
Voir Bittner et al. pour une étude de l’efficacité
du transfert d’ADN de tailles différentes. Le
tampon de transfert Bittner contient 25 mM
phosphate de sodium, pH 6,5. Aussi décrit est
une méthode pour l’introduction d’entailles par
nucléase limitée d’action en vue de faciliter le
transfert de fragments d’ADN plus grandes.
Tampons d’ADN recommandés comprennent
le tampon phosphate de sodium Bittner (voir
référence) et l’encéphalite à tiques. Pour l’ARN,
TAE est recommandé. TBE et TAE recettes
d’achat d’actions sont listées ci-dessous. Ces
tampons sont le plus souvent diluée à 1X, mais
la concentration peut aller jusqu’à 0,1X. Le
refroidissement est fortement recommandé pour
ces tampons, en particulier à des concentrations
plus élevées.