Hoefer TE42 - Manuel (Page 29)

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Tampons de transfert de protéines
Utilisation d’un tampon de faible force ionique,
tels que les deux ci-dessous, pour empêcher la
surchauffe. Utilisez le tampon alternatif CAPS
quand Tris ne peut pas être utilisé, comme dans
le séquençage peptidique. CAPS peut améliorer
le transfert en raison de son effet sur la charge
de la protéine (voir Matsudaira, 1987). Pour les
protéines natives, nous vous suggérons d’utiliser
le tampon d’électrophorèse pour le transfert
ainsi. Utilisation du tampon Towbin pour trans-
férer SDS-dénaturées protéines vers l’anode.
Towbin tampon
(Tris 25 mM, 192 mM de glycine,
20% v/v de méthanol, pH 8,3, 2 litres)
Tris (FW 121,1) 25 mM 6,0 g
Glycine (FW 75,07) 192 mM 28,8 g
SDS a (FW 288,4) 0,1% (3,5 mM) 2,0 g
Dissoudre dans 1,5 litres d’eau distillée. Ajouter du méthanol
comme l’exige
b . Porter à 2 litres avec de l’eau distillée. Ne
pas ajuster le pH, ce qui devrait se situer entre 8,2 et 8,4.
En option: Réfrigérer avant utilisation.
a En option: Ajout SDS peut améliorer l’efficacité du transfert.
b Selon le type de membrane choisie, addition de méthanol peut amélio-
rer les résultats de transfert (voir la discussion et le tableau ci-dessus).
Parce que les tampons contenant du méthanol peut se détériorer si
elles sont conservées pendant de longues périodes, ajouter du méthanol
comme l’exige juste avant le transfert.
CAPS tampon, 1X
(CAPS 10 mM, pH 11,0, 5 litres)
CAPS (FW 221,3) 10 mM 11,1 g
[3-(cyclohexylamino)-1-propanesulfonic acid]
Dissoudre dans 4,5 litres d’eau distillée, ajuster le pH à 11,0
avec conc. NaOH. Réglez le volume à 5,0 litres.