Hoefer TE42 - Manuel (Page 24)

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problème solution
Les patrons de bandes diffuses Transfert immédiatement après la séparation électrophorétique. Si
l’équilibrage avant le transfert, de raccourcir ou d’éliminer le temps
d’équilibrage ou de déplacer le gel de la chambre froide pendant
l’équilibrage.
Si tampon de transfert contient du méthanol (≥ 10%), à équilibrer
le gel dans un tampon de transfert pendant 30 minutes pour lui
permettre de reculer devant l’assemblage de la pile. Remarque: Parce
que le méthanol provoque le gel de diminuer légèrement, de grosses
molécules peuvent migrer plus lentement.
Veillez à ce que le gel est maintenu fermement contre la membrane
et qu’il ne se déplace pas une fois le contact est fait.
Si chauffage excédentaire se produit pendant le transfert, d’abaisser
la température du fluide de refroidissement dans l’échangeur
de chaleur.
Vérifiez que la surface préférée de liaison de la membrane (le cas
échéant) en contact avec le gel.
Contraignant inefficace à la membrane
Les paramètres chimiques
Fixer ou réticuler la molécule sur la membrane selon l’une des
exigences de l’acide nucléique, une protéine, ou du type à
membrane.
Préparer un tampon de transfert de protéines sans SDS.
Vérifiez que la quantité optimale de méthanol nécessaire pour le type
de membrane et de vérifier la solution tampon. Ajouter méthanol
10-20% dans le tampon de transfert afin d’améliorer la liaison à la
nitrocellulose.
Paramètres membranaires Porter des gants lors de la manipulation des membranes.
Membranes magasin à la température ambiante à l’abri du soleil afin
de garder les membranes activé.
Utilisez une membrane avec une taille de pores plus petite (0,10-
0,20 µm) si les protéines traversent la membrane, ou d’utiliser un
type de membrane différente.
Placez une membrane à la fois sur et sous le gel, si vous soupçonnez
une protéine se déplace dans la direction opposée à la majorité des
protéines. Vérifiez les deux membranes de protéine(s).
Vérifiez si l’échantillon trop est disponible pour la surface de liaison
en appliquant deux membranes au lieu d’un. Si «souffler à travers»
se produit, réduire la charge de l’échantillon.
Pour d’autres conseils de dépannage, reportez-vous à
Bjerrum, O.J. et al. (1988).