Hoefer TE42 - Manuel (Page 26)

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Facteurs influant sur le transfert
Des paramètres tels que caractéristiques de
l’échantillon, le type de membrane, de la taille
des pores du gel, et le tampon de transfert utilisé
tous contribuer à la transférabilité des macro-
molécules, et doit être gardé à l’esprit lors de
l’élaboration d’un protocole. Très petites espèces
moléculaires, par exemple, migrer rapidement,
mais souvent ne se lie pas aussi bien que des
molécules plus grosses; grosses molécules se lient
de manière plus efficace, mais ne éluer à partir
du gel le plus rapidement. La vitesse d’élution est
également affecté par la taille des pores du gel et
l’orientation des molécules.
En outre, la mesure dans laquelle les molé-
cules se lient à la membrane est influencée par
les caractéristiques membranaires tels que la
taille des pores et le type et les caractéristiques
tampons tels que le pH, le sel type et la concen-
tration, et la présence de détergents tels que le
dodécylsulfate de sodium (SDS). Conditions
requises pour l’élution efficace peut ne pas
coïncider avec des conditions optimales pour la
liaison. Pour trouver les conditions optimales
pour le transfert de votre échantillon, un équi-
libre entre ces effets: Si le taux d’élution de
l’échantillon est lente, une plus longue période
de transfert peut être nécessaire. (Dans notre
expérience, de faibles transferts de tension pour
des périodes plus longues n’offrent pas beaucoup
d’amélioration.) Si la liaison de l’échantillon est
insuffisante, essayez les conditions de tampon
différents. Pour un examen complet, voir Gers-
honi et Palade (1983).
Si le système de tampon de transfert est diffé-
rent du système de tampon d’électrophorèse, le
gel soit équilibrée avec du tampon de transfert
avant le transfert pour assurer le gonflement ou
le rétrécissement se produit avant les contacts de
gel de la membrane de transfert. Si cette étape