Hoefer TE42 - Manuel (Page 25)

•
p17
Notes électrotransfert
Avantages transfert électrophorétique
Transfert électrophorétique des protéines et des
acides nucléiques est beaucoup plus rapide que
les méthodes buvard d’abord décrit par Southern
de l’ADN, Alwine et al. Pour l’ARN, ou Renart
et al. pour des protéines. Procédé de transfert
réservoir utilise courant à haute pour réduire le
temps de transfert de la plupart des échantillons
à 45-60 minutes.
Transfert électrophorétique peut améliorer l’effica-
cité de transfert par rapport aux non-électropho-
rétique buvard, en particulier pour les protéines,
mais pas de technique de transfert quantitative n’a
encore été développé en raison de la complexité
des réactions. La récupération quantitative n’est
actuellement pas nécessaire pour la plupart des
objectifs, car macromolécules contraignantes à une
membrane augmente la sensibilité des méthodes de
détection telles que l’autoradiographie et permet la
détection de protéines spécifiques par des anticorps
ou des étiquettes d’affinité, et d’acides nucléiques
spécifiques par hybridation avec des brins complé-
mentaires de l’ARN ou d’ADN.
Le tampon peut être choisi à entraîner un trans-
fert vers soit la cathode ou l’anode. Le pH du
tampon doit être telle que toutes les espèces d’in-
térêt sont facturés et migrent dans le même sens.
La force ionique ne devrait pas être trop élevé,
car cela va produire un courant excessif et de la
chaleur. Pour cette raison, les conditions élevées
de sel utilisées par Southern blot pour le capillaire
de l’ADN ne peut pas être utilisé. Les systèmes
tampons les plus couramment utilisés sont ceux
de Towbin et al. pour transférer des protéines,
et de Bittner et al. pour le transfert d’acides
nucléiques. Systèmes de stockage pour le transfert
de chaque type d’échantillon sont indiqués plus
loin dans cette section.