Hoefer HE99X - Manuel (Page 22)

ARN mobilité
L’ARN peut également être séparés sur la base
de la taille. Pour éviter des anomalies dues à la
structure secondaire, l’ARN est dénaturé avant
ou pendant l’électrophorèse. Par exemple, frag-
ments d’ARN préalablement dénaturé avec du
glyoxal et le diméthylsulfoxyde peuvent être
séparés sur des gels d’agarose neutres, ou d’ARN
peut être fractionné sur des gels d’agarose conte-
nant de l’hydroxyde de méthylmercure ou le
formaldéhyde.
Échantillons d’ARN nécessitent habituellement
des trajets plus longs ou des tampons qui sont
facilement épuisés, et nécessitent donc la circu-
lation. Le Hoefer SUB20C et SUB25C unités
horizontales sont recommandés pour cette appli-
cation plutôt que le HE33.
Détection de l’ADN
ADN peut être détectée soit par la fluorescence
de bromure d’éthidium ou lié par autoradiogra-
phie d’ADN radiomarqué.
Le bromure d’éthidium (0,5 µg/ml) peuvent être
ajoutés à l’exécution de mémoire tampon pour
surveiller les progrès échantillon parce fluores-
cence du colorant sous une lampe UV révèle
emplacement bande. (Pour vérifier les progrès,
éteignez l’alimentation et retirez le couvercle de
l’unité d’agarose. Tenir une lampe UV porta-
tive près du bac en cours d’exécution. Replacez
le couvercle et tournez sur la puissance pour
reprendre l’électrophorèse.)
Sinon, après électrophorèse, tacher le gel dans
une solution de bromure d’éthidium (0,5 µg/
ml H
2
O) pendant 15 à 60 minutes, puis voir ou
photographier l’échantillon sur un transillumina-
teur UV.
Pour photographier le gel, soit placer le plateau
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Attention! Le bromure
d’éthidium est un mutagène
connu. Toujours porter des gants
lors de la manipulation.
Attention! Porter des lunettes de
sécurité UV et protègent la peau
lors de l’utilisation de n’importe
quelle source de lumière UV.
Remarque: Le bromure
d’éthidium ralentit migration de
l’ADN d’environ 15%.
Remarque: Réduire le temps de
coloration pour empêcher petits
fragments d’acides nucléiques à
partir des diffusante du gel.
Remarque: Pour obtenir un
exemple de l’électrophorèse
d’ARN, reportez-vous à
Molecular Cloning: A Laboratory
Manual by J. Sambrook and
D.W. Russell.