Hoefer HE99X - Manuel (Page 15)

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Préparation pour l’électrophorèse
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Facultatif: Pour suivre les progrès de séparation, soit
ajouter 0,5 µg/ml (concentration finale). De bromure
d’éthidium à la mémoire tampon en cours d’exécu-
tion actuellement ou ajouter 50 µg/ml (concentration
finale). Bromure d’éthidium pour le tampon d’échan-
tillon. Pour visualiser les progrès, éteignez l’alimenta-
tion, supprimer l’ensemble de couvercle, et de tenir
une lampe UV portatif près du gel.
Remarque: L’ajout du bromure d’éthidium à la
mémoire tampon fonctionnement ou de l’échantillon
ralentit la migration légèrement. Détection par cette
méthode n’est pas aussi sensible que par la coloration
après la course électrophorèse. Voir la section détec-
tion de l’ADN, pour plus de détails (page 14).
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Remplir la chambre avec un tampon jusqu’à ce que le
gel est immergé à ~
~1 mm.
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Charger les échantillons. Ajouter l’échantillon à 1/5 du
volume du tampon de charge de l’échantillon. Mélan-
ger chaque échantillon et de la charge dans un puits
avec une pipette de micro, en prenant soin de ne pas
percer le fond du puits ou de piéger des bulles.
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Placez le couvercle sur l’unité de façon à ce que
la cathode (fil noir) est à la fin la plus proche des
échantillons. (Échantillons d’acides nucléiques migrer
vers l’anode.)
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Connectez les fils de couleur codés (rouge sur rouge,
et noir sur noir) à une alimentation électrique approu-
vée. Régler la tension et la minuterie (si disponible).
Des gels d’agarose sont typiquement à tension
constante sous un gradient de tension dans la plage
de 2-5 V/cm. La distance entre les électrodes est de
~
~26 cm, donc un paramètre des résultats 130 V dans
un gradient de 5 V/cm.
Attention! Porter des lunettes
de sécurité UV et protègent la
peau lors de l’utilisation d’une
lampe UV.
Remarque: Reportez-vous aux
tampons, des volumes, et la
section des notes pour des
informations supplémentaires
et des lignes directrices à la
page 10.
Voir page 12 pour une recette
tampon d’échantillon de
chargement et des volumes ainsi
pour diverses tailles de peigne
dans les gels de différentes
épaisseurs.
Important! Si l’exécution de
deux séries d’échantillons dans
un gel, suivre la course en
étroite collaboration et d’arrêter
électrophorèse lorsque le
colorant marqueur s’approche
des puits dans le centre.