Hoefer SE600 - Manuel (Page 32)

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Temps
Un exécution est terminée lorsque le colorant suivi
atteigne le fond du gel. Dans un de 16 cm de gel
(SE600), de 1,5 mm d’épaisseur Laemmli gel de
SDS, exécutez à 25 mA / gel sans refroidissement,
il faut habituellement de 5 heures. Plus longs
gels besoin de temps proportionnellement plus;
séparations dans 24 cm gels (SE660) nécessitent
8 heures.
Paramètres d’électrophorèse pour ADN /
acrylamide des gels
Gels d’ADN sont généralement gérés à un réglage de
tension constante, et depuis des systèmes tampons
sont continues, les deux lectures de courant et
tension reste constante tout au long de la course.
Conditions de course sont exprimés en unités de V
/ cm. Publié conditions de fonctionnement varient
considérablement, mais les tensions dans la gamme
de 1 à 3 V / cm sont communs pour les courses de
nuit. Dans le SE600, nous nous sommes heurtés à
des gels jusqu’à 12,5 V / cm. (Refroidissement est
nécessaire à ce niveau de tension.)
Enregistrez chaque course
Gardez une trace de ce paramètre, le numéro courant
ou de tension et de l’épaisseur de gels, système de
mémoire tampon, et les lectures initiale et finale
courant ou de tension pour chaque course de sorte
que les résultats puissent être comparés. Des résultats
incohérents pour le même système et les paramètres
indiquent des problèmes potentiels tels que les fuites
de courant, des concentrations de tampon incorrectes,
les concentrations élevées de sel, ou de la qualité
chimique incompatible.
Contrôler la progression du groupe après 5 min, puis
de nouveau après 1 h, en gardant un œil sur le taux
de migration du colorant de suivi. L’exécution est
terminée lorsque le colorant suivi atteigne le fond du
gel. Surveiller le niveau du tampon et, si nécessaire,
reconstituer comme nécessaire pour maintenir
l’électrode supérieure immergée. (Un petit volume de
tampon peut fuir devant une plaque entaillée ou joint,
ou un tampon peut passer à travers le gel.) Attention! Après de surveillance
initiale, ne laissez pas l’appareil
sans surveillance pendant plus
de 1 h avant de vérifier l’état
d’avancement des bandes et le
niveau de tampon.