Hoefer SE600 - Manuel (Page 20)

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Des gels d’acrylamide
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Préparer la solution de monomère et versez le gel
Préparer la quantité requise de solution de monomère.
Désaérer et ajouter l’initiateur et un catalyseur juste
avant la coulée du gel. Introduire à la pipette la
solution dans un coin du sandwich, en prenant soin
de ne pas introduire de bulles d’air. Voir ci-dessous
pour le niveau de la solution appropriée en fonction
de l’application.
Pas de gel d’empilement (système continu). Remplir
solution à juste en dessous de la partie supérieure
du bord de plaque supérieure. Si des bulles sont
emprisonnées, les retirer avec une pipette ou une
seringue. Mettre en place un peigne (avec un léger
angle) dans chaque sandwich, en prenant soin de ne
pas emprisonner des bulles d’air sous les dents.
Club sandwich. Pipeter la solution dans les deux
sandwichs, le remplissage de chaque au même niveau
en dessous du bord cranté.
Empilement de gel. Remplir solution à 3–4 cm en
dessous du haut de la plaque de verre. Cette hauteur
permet 1 cm de gel d’empilement ci-dessous les
puits. Verser le gel et appliquer une superposition
(voir étape 2). Après le gel est fixé, de préparer le gel
d’empilement comme décrit ci-dessous.
Électrophorèse 2-D (système de la protéine
discontinue). Remplir solution de monomère à environ
1 cm en dessous du haut de la plaque de verre pour
permettre 4–5 mm pour la bande ou de gel IPG tube
et un joint d’agarose. (Un gel de concentration, il
faudra un espace supplémentaire). Sceller la bande
IPG ou de gel tube en place avec de l’agarose dissous
dans la gestion de mémoire tampon. Prenez soin
d’éviter le piégeage des bulles d’air entre les gels de
première et de deuxième dimension.