Hoefer SE600 - Manuel (Page 24)

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Préparer la solution de monomère d’empilage-gel,
versez le gel d’empilement, et d’introduire un peigne
(avec un léger angle) dans le sandwich, en prenant
soin de ne pas emprisonner de l’air sous les dents.
Prévoir un minimum de 1 h pour le gel à polymériser.
Préparation de l’échantillon et de
chargement
L’échantillon peut être chargé soit alors que le
sandwich est dans le lanceur de sorts ou après
la chambre tampon supérieure est fixée. Lors du
chargement d’échantillons tout en utilisant des
plaques intercalaires, les échantillons doivent
être chargées sans la chambre tampon supérieure
en place.
La quantité d’échantillon chargé dépend de
l’épaisseur du gel, la sensibilité de la méthode
de détection utilisée, et la quantité d’échantillon
prévu dans chaque bande. Dans un système
tampon continu, l’échantillon de protéine doit
être relativement concentré, parce qu’aucun
gel d’empilement est utilisé. Dans un système
tampon discontinu, la zone dans laquelle chaque
espèce moléculaire migre est aiguisée par le gel
d’empilement, de sorte de l’échantillon n’a pas
besoin d’être aussi concentrés.
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Préparer le puits
Retirer le peigne en secouant délicatement un côté
à côté et puis en le soulevant vers le haut pour
éviter d’endommager les parois du puits. Rincer
soigneusement chaque puits avec de l’eau distillée
pour enlever l’acrylamide non polymérisée et puis
les égoutter en inversant le sandwich de gel (ou
roulette). Remplir chaque puits avec du tampon
d’électrophorèse.
Remarque: Avec Coomassie
Blue
™ il est possible de
détecter une pg de protéine
dans une seule bande. Avec
les taches d’argent les plus
sensibles, il est possible de
détecter aussi peu que 10 ng
de la protéine.