Eppendorf BioSpectrometer fluorescence - Manuel (Page 34)

Méthodes
Eppendorf BioSpectrometer
® fluorescence
Français (FR)
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Proteins direct UV
• Détermination de la concentration des protéines par une mesure effectuée à 280 nm et évaluation avec
facteur ou standard.
• Méthodes pré-définies pour l'édition directe des absorbances sous forme de résultat (protéine A 280) et
pour l'évaluation réalisée avec des coefficients d'absorbance spécifiques à l'albumine (albumine A 280).
• Méthode pré-programmée pour les cuves de microlitres : mesure de la protéine dans les échantillons de
un ou plusieurs microlitre(s) avec faisceau lumineux de 1 mm (avec cuves de microlitres comme
Eppendorf μCuvette G1.0 ou Hellma
® TrayCell).
• Informations complémentaires sur la pureté de la protéine mesurée : absorbance de la longueur d'onde
d'arrière-plan (prédéfinie : 320 nm; l'absorbance de la protéine pure devrait être ici d'env. zéro).
• Correction partielle de la turbidité possible à l'aide du paramètre Background.
• Lors de la programmation de la méthode, le facteur pertinent est importé en sélectionnant la protéine
dans une liste de prescriptions. Les facteurs sont définis séparément dans les fonctions du groupe Gen.
method param. Différentes protéines sont pré-programmées dans Gen. method param.. Vous pouvez
en ajouter d'autres.
Proteins (with reagent)
• Détermination de la concentration des protéines par une mesure basée sur les réactions des colorants et
par une évaluation avec standards ou facteur (généralement : évaluation avec courbe standard).
• Les méthodes Bradford, Bradford micro, Lowry, Lowry micro, BCA et BCA micro sont pré-programmées.
Suivant le fabricant de réactif, il faudra éventuellement modifier la "Curve fit" (type de courbe standard).
Dye labels
• Pour les biomolécules marquées au colorant : détermination de la concentration de la biomolécule
(acide nucléique ou protéine) par une mesure effectuée à 260 ou 280 nm et du colorant au cours d'une
mesure.
• Évaluation avec facteur. Outre la biomolécule, il est possible de mesurer parallèlement jusqu'à deux
colorants à deux différentes longueurs d'onde.
• Par ailleurs, évaluation de la fréquence d'incorporation du colorant (FOI). Sélection entre deux
différents procédés de calcul FOI.
• Méthodes déjà pré-programmées : ssDNA, marquées avec Cy 3 ou Cy 5.
• Il est possible de corriger l'influence du spectre de colorants sur la justesse de la mesure de la
biomolécule.
• Correction partielle de la turbidité possible à l'aide du paramètre Background.
• Informations complémentaires sur la pureté des substances mesurées : rapport A260/A280 et rapport
A260/A230 (valeurs du rapport limitées aux acides nucléiques), spectre de longueurs d'onde
d'absorbance.
• Lors de la programmation de la méthode, il suffit de sélectionner la biomolécule et le colorant dans des
listes prescrites pour importer différents paramètres pertinents comme les longueurs d'onde de mesure
et les facteurs d'évaluation. Ces paramètres sont définis séparément dans les fonctions du groupe
Gen.
method param. Différents acides nucléiques, protéines et colorants sont pré-programmés dans Gen.
method param.. Vous pouvez ajouter d'autres acides nucléiques, protéines et colorants.
• Ne concerne que les acides nucléiques marqués : il est possible de convertir les concentrations en
concentrations molaires et (après la saisie du volume d'échantillon) en quantités d'acide nucléique et de
colorant (étape :
process results).
Bacterial density
• Mesure de la turbidité pour déterminer la densité bactérielle.
• La mesure à 600 nm est déjà pré-programmée.
• Informations complémentaires : spectre de longueurs d'onde d'absorbance.