Hoefer HE33 - Manuel (Page 15)

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La course électrophorèse
Reportez-vous aux notes, des tampons, et la section
des volumes pour des informations supplémentaires.

Réfrigérer la base avant utilisation, en particulier
lorsque la hausse des réglages de tension sera utilisé
ou lorsque la séparation, il faudra plus de 30 min.
Remarque: Pour suivre les progrès de séparation, soit
ajouter 0,5 µg/ml (concentration finale). De bromure
d’éthidium à la mémoire tampon en cours d’exécution
aujourd’hui, ou ajouter 50 µg/ml (concentration finale).
Bromure d’éthidium pour le tampon d’échantillon.
Pour visualiser les progrès, éteignez l’alimentation,
supprimer l’ensemble de couvercle, et de tenir une
lampe UV portatif près du gel.
Ajout du bromure d’éthidium à la mémoire tampon
fonctionnement ou de l’échantillon ralentit la migration
légèrement. Détection par cette méthode n’est pas
aussi sensible que la coloration et la visualisation sur
un transilluminateur. (Voir la détection d’ADN, p15.)

Remplir les deux chambres du tampon avec tampon
de migration jusqu’à ce que le tampon est d’environ
1 mm de profondeur sur le gel. (Ce qui nécessite
environ 220 ml.)

Charger les échantillons. Ajouter l’échantillon à un
tampon d’échantillon de chargement 5X et mélanger
(1/5 du volume final est le tampon de charge, voir
p14). Utiliser un micro-pipette pour charger chaque
échantillon, en prenant soin de ne pas percer le fond
du puits ou de piéger les bulles.

Placez le couvercle de manière à ce que la cathode (–)
fil noir est à l’extrémité la plus proche de l’échantillon
ainsi. (Échantillons d’acides nucléiques migrer vers
l’anode (+) fil rouge. Connectez les fils de couleur codés
(rouge sur rouge, et noir sur noir) à une alimentation
électrique approuvée, comme le PS300B. Réglez le
niveau de tension et la minuterie (si disponible) en
fonction du degré de résolution recherchée.
Attention: Le bromure
d’éthidium est un mutagène
connu. Toujours porter des gants
lors de la manipulation.
Porter des lunettes de sécurité
UV et protègent la peau lors de
l’utilisation d’une lampe UV.
Remarque: Si aucun colorant
a été ajouté au liquide de
refroidissement, placez la base
sur un fond sombre pour voir les
puits plus facilement.
Remarque: Au réglage maximal,
l’appareil commence la
surchauffe dès que la base
réfrigérés atteint la température
ambiante. En cas de surchauffe
n’est pas contrôlée, le gel va
fondre et/ou la base de l’unité
se déformera!