Hoefer SE300 miniVE - Manuel (Page 33)

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problème solução
Inefficace contraignant
Les paramètres chimiques
• Fixer ou réticuler le moles des exigences de l’acide
nucléique, de type protéine, ou une membrane.
• Préparer un tampon de transfert de protéines sans
SDS. SDS peut améliorer l’efficacité de transfert,
mais réduit contraignant.
• Vérifiez que la quantité optimale de méthanol néces-
saire pour le type de membrane et de vérifier la
solution tampon. Ajouter méthanol 10-20% dans le
tampon de transfert afin d’améliorer la liaison à la
nitrocellulose.
Paramètres membrane • Porter des gants lors de la manipulation des
membranes. Rangez les membranes correctement.
Protégez-les contre les températures extrêmes et
lumière directe du soleil.
• Si les protéines traversent la membrane sélection-
née, essayez un autre type ou une avec une plus
petite taille des pores (0,10-0,20 µm).
• Si protéines différentes peuvent être migration dans
des directions opposées, placer une membrane sur
les deux côtés du gel.
• Si la charge d’échantillon peut être supérieure à la
capacité de la surface de liaison, appliquer deux
membranes. Si “souffler à travers” se produit,
réduire la charge de l’échantillon.
Les patrons de bandes diffuses • Mener l’électrotransfert immédiatement après la
séparation électrophorétique.
• Raccourcir ou d’éliminer l’étape d’équilibrage avant
électrotransfert, ou d’équilibrage conduite dans la
chambre froide.
• Si le tampon de transfert contient du méthanol
(≥10%), équilibrer le gel pour 30 minutes pour lui
permettre de réduire entièrement. Remarque: le
retrait du gel peut ralentir la migration des molécules
de grande taille sur le gel.
• Veillez à ce que le gel ne se déplace pas une fois en
contact avec la membrane.
• Vérifiez que toutes les surfaces de liaison préféré de
la membrane est confronté le gel.