Hoefer SE300 miniVE - Manuel (Page 32)

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Buvard dépannage
problème solução
Transfert incomplet
Des zones blanches sur la membrane • Retirez toutes les bulles d’air emprisonnées dans la
pile de transfert; prendre soin en particulier lors de
l’assemblage grande pile pour éviter les bulles d’air
se forme par chaque couche est placée.
• Vérifier la continuité de l’électrode.
• Utiliser un tampon de force ionique inférieure.
Molécules ne migrent pas de gel • Augmenter l’intensité du champ.
• Augmenter la période de transfert. (Essayez de le
doubler.)
• Ne pas exposer le gel à la coloration ou la fixation
des agents avant le transfert.
• Utilisez un diluant de gel.
• Réduire la concentration d’acrylamide gel.
• Pour les protéines, utilisez 3,5 mM SDS (0,1%)
dans le tampon de transfert.
• Diminution du méthanol dans le tampon de trans-
fert de protéines ou de réduire le montant à un
minimum. En règle générale 10% de méthanol est
nécessaire pour une bonne liaison des membranes
de nitrocellulose.
• Augmenter la longueur de taches d’ADN de temps
sont dépuriné. Vérifiez le pH du tampon. La
plupart des tampons ne devrait pas être ajustée;
faire tampon frais.
• Pour les gels natifs, augmenter la charge nette sur
la protéine en changeant d’un tampon de trans-
fert avec un pH différent. Abaisser le pH (<6-7)
augmente la charge positive sur les protéines; pH
plus élevé (>6-7) augmente la charge négative sur
les protéines.