Hoefer SE300 miniVE - Manuel (Page 28)

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Préparer la pile de transfert
Transférer l’échantillon dès que possible après
l’électrophorèse pour minimiser la diffusion
de l’échantillon dans le gel. Transfert électro-
phorétique peut être effectuée sur un maximum
de quatre des gels de mini en même temps, si
deux des gels sont placés dans chacun des deux
modules.
La pile de transfert comprend le gel et la
membrane, le papier filtre, et trois éponges
emballage. Le gel détermine la taille de la
membrane et le papier filtre.

Pour chaque gel, couper la membrane et deux
morceaux de papier filtre de la même taille que le gel,
mais pas plus de 8,5 × 10,5 cm.

Équilibrer le gel dans un tampon de transfert pendant
10 minutes.
Équilibrage du gel permet de gonfler ou se contracter
avant son contact avec la membrane de transfert et
élimine les sels tampons excès et des détergents du
gel. Plus d’équilibration peut entraîner des bandes
diffuses.

Pré-humides des membranes de nitrocellulose ou de
nylon dans l’eau distillée, en prenant soin de ne pas
emprisonner des bulles d’air.
Tremper une extrémité de la membrane dans la
mémoire tampon et lentement submerger, lui permet-
tant d’humidifier par action capillaire.
Pré-humide PVDF ou d’autres membranes hydro-
phobes dans le méthanol.
Après le pré-mouillage, faire tremper tous les types
de membranes dans un tampon de transfert pour
2-5 minutes.

Mouillez les deux morceaux de papier filtre dans un
tampon de transfert.
Important! Essayez de placer
le gel correctement la première
fois. Les protéines peuvent
commencer à transférer immé-
diatement. Une fois le transfert
commence, se déplaçant le gel
de fausser les résultats ou de
faire “des bandes d’ombre” sur
la tache.