Hoefer SE300 miniVE - Manuel (Page 25)

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problème solution
Échantillon coloré recueille: Près du front de tampon:
• Protéines ne sont pas suffisamment limité par le gel de
résolution, à augmenter le T.%
Près du sommet du gel lorsque le front de la mémoire
tampon a atteint le fond:
• La taille des pores de gel est trop petit. Diminuer la T% du
gel de résolution.
• La protéine a précipité. Chauffer l'échantillon à une
température inférieure (70 °C ou moins) pendant 1-2 min.
Résolution bande Pauvre • Utiliser uniquement les réactifs de haute qualité.
• Effectuer la séparation à un niveau plus bas courant ou
tension.
• Dialyser ou dessaler l'échantillon.
• Réduire le volume d'échantillon ou de la concentration.
• N'utilisez l'urée fraîchement désionisée.
• Améliorer la dissociation des sous-unités par chauffage
échantillon dans un tampon d'échantillon SDS 1-2 minutes
à 100 °C.
• Ajouter plus mercaptoéthanol ou le dithiothréitol; vérifier
traitement de l'échantillon.
• Seulement utiliser des gels qui ont été récemment préparés.
• Des valeurs de pH de la séparation Vérifier et l'empilage
des solutions de gel. Ne reculez pas-titrage tampons.
La préparation des échantillons:
• Échantillons de chaleur pour pas plus de 1-2 minutes à
100 °C. Conservez-le sur la glace après le chauffage.
• Conserver l'échantillon sur la glace avant qu'il ne soit dénaturé.
• Ajouter inhibiteurs de la protéase, si nécessaire pour
prévenir la dégradation protéolytique de l'échantillon.
• Conserver les échantillons à congeler en portions aliquotes
pour éviter la congélation et la décongélation répétées.
(Conserver à -40 °C à -80 °C.)
• Versez un plus grand gel de stacking. (Pour de meilleurs
résultats, permettent une hauteur de gel d'empilement de
2,5 fois la hauteur de l'échantillon dans le puits.)
• Jeter des solutions d'acrylamide obsolètes et utiliser
uniquement le grade le plus élevé d'acrylamide.
• Lors de la préparation des échantillons, évitez d'utiliser
des solutions de sodium avec une haute concentration de
potassium ou.
Bleu de bromophénol ne pas affûter
dans une zone concentrée dans le
gel d'empilement