Eppendorf BioSpectrometer fluorescence - Manuel (Page 29)

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Commande
Eppendorf BioSpectrometer ® fluorescence
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5.3.3 Remarques importantes pour les mesures
À observer lors de chaque mesure :
• Pour les cuves en plastique : combien de mesures peuvent être réalisées successivement et
en toute fiabilité dans la cuve ?
• Avant les mesures d'échantillons ou standards, mesurez la valeur témoin de la cuve afin de
compenser la valeur témoin de la cuve en plus de la valeur témoin du réactif.
• Les résultats de la valeur témoin restent enregistrés pour une série de mesures, mais une
nouvelle mesure de la valeur témoin est possible à tout moment entre les mesures des
échantillons.
• Les valeurs d'absorbance et RFU affichées correspondent toujours aux valeurs
directement mesurées. Le facteur de dilution ou le facteur de cuve, ainsi que les
extinctions background sont pris en considération uniquement au moment du calcul final
du résultat(voir Valeurs d'absorbance à la page 91).
• La durée moyenne entre le début d'une mesure et l'affichage de son résultat est d'environ
2 à 3 secondes. S'il n'arrive pas suffisamment de lumière sur le récepteur (en cas
d'absorbance trop élevée ou des valeurs RFU basses), la durée de la mesure peut passer
automatiquement à 9 secondes (photométrie) ou à 6 secondes (fluorimétrie) pour
augmenter la fidélité de la mesure
• Veillez à ce que les valeurs d'absorbance ne dépassent pas la limite supérieure de la plage
de mesure photométrique.Si c'est le cas, rejetez le résultat de la mesure. La limite
supérieure de la plage de mesure photométrique ne dépend pas uniquement de la
longueur d'onde (voir Propriétés photométriques à la page 88), mais également de la valeur
témoin de la cuve. Les ultramicrocuves munies d'un petit diaphragme comme
TrayCell
(Hellma) peuvent avoir une valeur témoin d'env. A = 1. La plage de mesure photométrique
disponible est réduite de cette valeur. Vous pouvez estimer la valeur témoin de la cuve en
mesurant la cuve remplie d'eau déminéralisée en tant qu'échantillon contre le puits de
cuve vide en tant que blanc. La valeur témoin de la cuve de la Eppendorf μCuvette G1.0
doit être négligée (proche de A = 0).
Fluorimétrie : une fluorescence propre augmentée de la cuve (typique pour les cuves en
plastique) peut restreindre la plage de mesure disponible.
• Après la mesure, éliminez entièrement la solution de mesure avant de verser la nouvelle
solution de mesure afin de limiter le volume de liquide résiduel. Si en raison d'importantes
différences de concentration, on peut s'attendre à un volume de liquide résiduel entre un
échantillon et le suivant, rincez la cuve entre les mesures.
• Une dérive photométrique peut apparaître en cas de différences de température entre la
lampe et l'environnement. Un appareil venant d'un environnement plus froid doit donc être
d'abord ramené à température ambiante.
Évitez les brusques variations de température. Si vous avez de grandes séries de mesure
ou désirez refaire les mesures après un certain temps, remesurez la valeur témoin.