Hoefer TE22 - Manuel (Page 21)

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Notes électrotransfert
Avantages transfert électrophorétique
Transfert électrophorétique des protéines et des
acides nucléiques est beaucoup plus rapide que
les méthodes buvard d’abord décrit par Southern
de l’ADN, Alwine et al. Pour l’ARN, ou Renart
et al. pour des protéines. Procédé de transfert
réservoir utilise courant à haute pour réduire le
temps de transfert de la plupart des échantillons
à 45-60 minutes.
Transfert électrophorétique peut améliorer l’effica-
cité de transfert par rapport aux non-électropho-
rétique buvard, en particulier pour les protéines,
mais pas de technique de transfert quantitative n’a
encore été développé en raison de la complexité
des réactions. La récupération quantitative n’est
actuellement pas nécessaire pour la plupart des
objectifs, car macromolécules contraignantes à une
membrane augmente la sensibilité des méthodes de
détection telles que l’autoradiographie et permet la
détection de protéines spécifiques par des anticorps
ou des étiquettes d’affinité, et d’acides nucléiques
spécifiques par hybridation avec des brins complé-
mentaires de l’ARN ou d’ADN.
Le tampon peut être choisi à entraîner un trans-
fert vers soit la cathode ou l’anode. Le pH du
tampon doit être telle que toutes les espèces
d’intérêt sont facturés et migrent dans le même
sens. La force ionique ne devrait pas être trop
élevé, car cela va produire un courant excessif
et de la chaleur. Pour cette raison, les conditions
élevées de sel utilisées par Southern blot pour le
capillaire de l’ADN ne peut pas être utilisé. Les
systèmes tampons les plus couramment utilisés
sont ceux de Towbin et al. pour transférer des
protéines, et de Bittner et al. pour le transfert
d’acides nucléiques. Systèmes de stockage pour
le transfert de chaque type d’échantillon sont
indiqués plus loin dans cette section.