Hoefer TE22 - Manuel (Page 14)

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Placez une éponge en mousse 3 mm d’épaisseur sur
la cassette ouverte immergée et appuyez doucement
jusqu’à ce que tout l’air est expulsé. Placez une
feuille de papier buvard sur l’éponge, puis placer
la membrane sur le papier buvard. Placer le gel qui
contient un échantillon qui a été séparé par électro-
phorèse et on équilibre (si nécessaire) avec transfert
de tampon sur la membrane. Doucement rouler une
pipette de verre ou de tube à essai sur le gel pour
éliminer l’air emprisonné entre la membrane et le
gel. Couvrir le gel avec une feuille de papier buvard,
puis placez une éponge de la bonne épaisseur (voir le
schéma ci-dessous), à nouveau en appuyant légère-
ment pour expulser l’air emprisonné.
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Fermez la cassette et appuyer légèrement pour
verrouiller les onglets. La cassette assemblé devrait
tenir le gel en contact ferme avec la membrane sans
presser le gel. Si la pile semble lâche, ajouter des
feuilles de papier buvard, si la pile semble serré,
remplacer l’éponge dessus (sur le gel) avec une feuille
de papier buvard. Si la suppression de l’éponge
de fond (ci-après le gel), substituer au moins deux
feuilles de papier buvard de créer un espace entre la
membrane et le panneau de cassette.
une éponge 3 mm pour des
gels > 1,5 mm
-Ou-
un 6 mm éponge pour les
gels ≤ 1,5 mm.
papier buvard
papier buvard
une 3 mm éponge
gel
membrane
Fig 2. Transfert assemblage de la
pile. La pile est orienté de telle
sorte que les molécules chargées
négativement migrer vers l’anode
gris (+).
Important! Ne surchargez pas la
cassette.
Remarque: Essayez de placer le
gel correctement la première fois
parce que les protéines peuvent
commencer à transférer immé-
diatement, une fois le transfert a
commencé, se déplaçant le gel
de fausser les résultats ou de
causer «des bandes d’ombre» sur
la tache.
Les panneaux cassettes sont codés
par couleur: noir (en haut) = côté
de la cathode gris (en bas) = côté
de l’anode.
Monter la cassette dans un bac contenant du
tampon de transfert d’environ 3 cm de profondeur.