Hoefer SE900 - Manuel (Page 33)

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9. 1% en 1X tampon d'électrophorèse d'agarose
(100 ml)
Dans un flacon de 500 ml ajouter:
Agarose
1 g
Tampon d'électrophorèse 10X (Solution #8) 10 ml
Désionisée H
2
O 90 ml
Bleu de bromophénol 3 mg
Agitez doucement de suspendre agarose.
La chaleur à faible puissance dans un four à micro-ondes jusqu'à agarose est
complètement dissous.
Diviser dans des tubes de ~1,5 ml à vis en plastique de haut niveau.
Magasin en aliquots à 4 °C.
10. Gradient Gel coulage d'une solution de déplacement
(Glycérol à 50% en 0,375 mM TrisCl 8.8, 0,1% SDS, 200 ml)
100 ml de glycérol
1,5 M pH TrisCl 8.8 (Solution #2) 50 ml
Désionisée H
2
O 50 ml
Bleu de bromophénol 3 mg
Mélangez bien.
11. Solution SDS tampon d'équilibration
Cette solution est utilisée après l'IEF, et avant PAGE deuxième dimension.
Les bandes IPG sont immergés dans la solution en excès pour élever le pH
du tampon de bande de sorte qu'il est apte à PAGE, et à revêtir les protéines
en SDS uniformément de telle sorte que leur migration correctement dans le
gel de seconde dimension.
Prépare 200 ml
(6 M d'urée, 75 mM Tris-HCl pH 8,8, glycérol 29,3%, 2% SDS, 0,002%
bleu de bromophénol)
Conc. finale Montant
Urée (FW 60.06) 6 M 72,1 g
1,5 M Tris-HCl, pH de la solution stock de 8,8 75 mM 10,0 ml
Glycérol (87% w/w) 29,3% (v/v) 69 ml
SDD (FW 288,38) 2% (w/v) 4,0 g
Bleu de bromophénol 0,002% (w/v) 4 mg
Désionisée H
2
O à 200 ml
Aliquoter en 30 aliquotes ml et conserver à -20 °C ou au-dessous.
24 cm IPG exigent 5-10 ml par bande par étape d'équilibration. Plus cour-
tes bandes peuvent utiliser un volume proportionnellement moins par étape
équilibrations.
Attention! SDS peut causer la solution à
ébullition à feu afin preuve de prudence lors
de chauffage et d'éviter de déborder.
Remarque: les bandes IPG doivent être
équilibrés, juste avant PAGE dimensin
seconde. Ne pas équilibrer les bandes
IPG avant de le ranger à -20 °C.