Hoefer SE900 - Manuel (Page 18)

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Préparer la solution d'acrylamide
1 Voir l'annexe A pour une SDS-PAGE recettes. Pour coulée six
SE9102-1-1.0 gels, 400 ml est nécessaire.
2 Désaérer la solution de gel pendant 5 minutes. Ajouter le (amor-
ceur) 10% p/v et le APS (catalyseur) 10% v/v TEMED* juste avant la
coulée, les gels. Verser la solution de gel dans le canal à l'arrière de
la machine de coulée. La solution sera couler le long du canal et de
remplir les casssettes partir du bas (figure 15).
* Le TEMED est diluée à 10% pour une meilleure répartition lors du
mélange des solutions de gel.
3 Verser la solution comme une lente, flux continu. Essayez de réduire
au minimum l'introduction de bulles d'air dans le flux.
4 Remplir solution à 0,5-1 cm en dessous du haut de la plaque de verre
pour laisser place à la bande IPG et un joint d'agarose.
5 Superposer chaque gel avec une mince couche d'eau-n-butanol saturé
ou tampon de gel dilué pour obtenir la meilleure surface sur la partie
supérieure du gel. Lentement appliquer la superposition à proximité
de la surface du gel d'un côté, en prenant soin d'éviter les mélanges.
Autoriser la superposition de circuler à travers la surface nu (Fig. 16).
6 Permettre au gel pour polymériser environ une heure.
7 Retirez le cache en rinçant le haut du gel à plusieurs reprises avec de
l'eau distillée. Utiliser le tampon gel dilué pour le rinçage final.
8 Option de stockage: Les gels deuxième dimension peut être stockée
temporairement dans le lanceur.
Les gels deuxième dimension peut également être retiré de la poudre
et stockés 1-2 jours immergés dans un tampon de gel avant utilisa-
tion. Il ya un risque que, avec un stockage prolongé, l'eau des gels
abosrb, et la cassette s'ouvre partiellement, conduisant à biaisés fronts
de teinture.
Fig 15. Verser la solution dans un
flux lent et continu.
Fig 16. L'application de superposition.
Remarque: Un gel d'empilement peut être
utilisé si vous le souhaitez, mais il n'est pas
nécessaire.
Remarque: Il est nécessaire d'enlever les
superpositions butanol avant de ranger les
gels dans la coulée. Laissant butanol dans le
lanceur peut conduire au blanchiment et à la
fragilité de l'acrylique.
Attention! L'acrylamide est une neurotoxine.
Un soin extrême doit être utilisé lors de la
manipulation et la préparation des solutions
d'acrylamide.