Hoefer SE900 - Manuel (Page 19)

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Des gels de gradient
Des gels à gradient linéaire peut être coulé à l'aide d'un accessoire
en option, la machine à Hoefer Dégradé SG500. Le SG500 mélange
faible pourcentage et des solutions de haute gel de pourcentage qui
sont pompés dans le port au bas de la coulée de gel multiple en util-
isant une pompe péristaltique.
Verser un gel dégradé linéaire
1 Assemblez la roulette gel multiples tel que décrit à la page 11, avec
les deux exceptions suivantes:
• Ne pas insérer le joint en caoutchouc triangulaire au fond de la
coulée de gel.
• Retirer le capuchon de l'orifice d'entrée du bas.
2 Branchez une extrémité du tube de qualité de laboratoire pour le port
de sortie SG500. Insérez le tube à travers une pompe péristaltique,
et branchez l'autre extrémité au port d'entrée de la façade SE915 gel
lanceur multiple.
3 Calculez le volume de solution de monomère nécessaire. Divisez le
volume total de moitié et de préparer ce volume à la fois des solutions
de haut et de bas-pourcentage d'acrylamide.
4 En option: Ajuster la solution d'acrylamide plus élevés en pourcentage
à 15% (p/v) de saccharose ou de jusqu'à 25% (v/v) de glycérol pour
améliorer la superposition.
5 Verser le pourcentage plus élevé, ou lourd solution d'acrylamide, dans la
chambre la plus éloignée de SG500 la sortie. Ouvrir le robinet juste assez
longtemps pour chasser l'air entre les chambres et puis sur Fermer.
6 Verser le pourcentage inférieur, ou plus léger solution d'acrylamide, dans
la chambre de mélange, la chambre avec la sortie SG500.
7 Placez une barre d'agitation dans la chambre de mélange. Placer la
machine sur gradient d'un agitateur magnétique, et de commencer
une agitation à un taux qui se mélangent bien, mais n'introduit pas de
bulles dans la solution.
8 Mettre la pompe péristaltique à un niveau bas, et ouvrir le robinet entre
les deux chambres SG500.
9 La solution de gel doit lentement couche dans la région triangulaire au
bas de la poudre de gel multiples, et remplir les cassettes uniformément
à partir du bas vers le haut.
10 Une fois que la quasi-totalité solution a quitté la pause fabricant de
la pompe gradient temporairement, et remplir la machine à gradient
avec ~200 ml de la solution de déplacement. Redémarrer la pompe
et pomper la solution à travers la tubulure, forçant les solutions
d'acrylamide vers le haut dans les cassettes de gel jusqu'à ce que la
hauteur désirée. Arrêter la pompe.
11 Superposez chaque gel avec 1 ml d'eau saturée en n-butanol ou le
tampon gel dilué pour obtenir la meilleure surface de gel supérieur.
Lentement offrir la solution de superposition d'un côté, ce qui minimise
le mélange, et de permettre la superposition de circuler sur la surface
supérieure nu.
12 Permettre à des gels pour polymériser pour un minimum d'une heure.
Après polymérisation, verser la superposition et rincer la surface du gel
à plusieurs reprises avec de l'eau distillée.
13 Préparer la solution de gel d'empilement monomère. Verser le gel
d'empilement sur la surface du gel de résolution. Prévoir un minimum
d'une heure pour le gel d'empilement à polymériser.
Remarque: Il est une bonne idée
de pratiquer avec de l'eau et la
pompe péristaltique pour déterminer
empiriquement les volumes et les débits de
jeter des gels de gradient de bonnes.
Remarque: La solution de déplacement
est nécessaire. Le gradient ne fera pas
correctement sans déplacer l'acrylamide à
l'intérieur des cassettes. Il permet également
de maintenir l'acrylamide de polymérisation
dans le tube et dans le fond de la roulette,
ce qui simplifie nettoyage. La solution de
déplacement ne doit pas entrer dans le fond
des cassettes.
Remarque: Évitez tout contact avec les bulles
d'air dans le tuyau de la pompe, les bulles
d'air vont interférer avec la formation de
gradient bon.