BINDER C 150 - Manuel (Page 59)

C 150 (E2) 12/2012 Seite 59/90
14. Evitement de contamination microbienne
Les contaminations microbiologiques les plus importants des cultures de cellules et de tissu sont causés
par des bactéries, des mycoses, des levures, des mycoplasmes et des virus. Ce chapitre offre une vue
d’ensemble des sources potentielles de contamination et des précautions et des mesures à cela.
14.1 Cellules et média
• Cultures primaires du tissue d’origine: surveillance et contrôle habituel des cultures.
• Cellules / ligne de cellules d’origine inconnue ou des banques de cellules: N’utiliser que des cellules
d’origine connue et contrôlée. surveillance et contrôle habituel des cultures nouvelles.
• Média et sérums: N’utiliser que des sérums d’origine connue et contrôlée (sérums libre de myco-
plasmes, p.ex. irradiés UV ou γ).
• Suspensions de virus, solution d’anticorps etc.: N’utiliser que des substances d’origine connue et con-
trôlée.
• Des appareils de laboratoire, des média et des substances, qui étaient en contact avec des cultures
possiblement contaminées : stériliser / autoclaver / jeter.
L’usage des antibiotiques dans le medium de culture peut empêcher la reconnaissance des bactéries:
Employez des antibiotiques de façon précise et avec modération.
14.2 L’équipement du labo et les environs de l’incubateur
Des sources de contamination dans le laboratoire de culture de cellules sont des germes provenant de
l’air du local, des appareils de laboratoire, des conditions architectoniques et le personnel du laboratoire.
•
Conservation stérile des pipettes et des outils suite à l’autoclavage.
• Hotte à flux laminaire: le moins d’objets possible hors de tube d’aspirateur et bec Bunsen, positionnés
facilement accessibles et séparés l’un de l’autre, désinfection de la surface avec des solutions d’alcool
avant et après l’utilisation, nettoyage en dessous, tests réguliers sur la stérilité des filtres.
• Nettoyage / désinfection réguliers de l’équipement du laboratoire, comme la centrifuge, le microscope,
le bain d’eau, le réfrigérateur ainsi que le téléphone.
• Ne pas installer des appareils directement sur le sol.
• Des murs rugueux et humides sont inappropriés.
• Calfeutrage des portes et fenêtres non étanches.
• Climatiseur muni de filtres spéciaux.
• Réduire le nombre de personnes et leurs mouvements dans le laboratoire, dus à des applications ne
pas spécifiques et aux des distances aux appareils nécessaires par des distances courtes et une
bonne organisation. Il est utile d’installer l'incubateur à CO
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près de la hotte à flux laminaire.
• Surveillance régulière microbiologique du laboratoire de culture cellulaire.
14.3 Travail et comportement dans le laboratoire
Des sources de contamination sont le personnel du laboratoire propre (des germes adhérents, transmis-
sion de la flore orale par les sécrétions des voies respiratoires) et la manipulation des appareils et des
cultures. Nous recommandons de la formation des collaborateurs en techniques aseptiques, en sécurité
de laboratoire et en Bonne Pratique de Laboratoire (BPL).
Exemples de règles générales pour réduire le risque de contamination
•
Réduction du nombre de germes aux mains (laver les mains avec du savon antimicrobienne, utiliser
des serviettes jetables, enduire les mains sèches de solution d’alcool).