Hoefer PR625 Immunoblot - Manuel (Page 12)

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Annexe A: Notes techniques
Note 1: blocage de la membrane
Membranes doivent toujours être bloquées avant
de monter dans ImmunoBlot. S’il vous plaît
suivez les instructions pour bloquer fourni dans
votre kit de détection de Western blot.
En règle générale, 5% non-lait écrémé en poudre
ou 5% de BSA sont utilisés comme agents de
blocage.
Blocage avec des détergents Tween-20 ou
autre seule n’est pas recommandée car elle
peut provoquer lente diffusion latérale des
protéines à travers la membrane de nitrocel-
lulose. We recommend exécution de l’étape
initiale de blocage dans une solution contenant
une protéine (par exemple 5% de BSA) sans
détergent. Éviter les lavages étendues avec des
solutions contenant pas de protéine avant le
montage de la membrane dans ImmunoBlot.
Dans de nombreux cas, le blocage satisfaisants
peuvent être atteints par incubation avec veau
nouveau-né PBS/10% serum/0.1% de Tween-20
pour un minimum de une heure à température
ambiante. Toutefois, les agents de blocage se
distinguent par leur efficacité en fonction des
circonstances. Pour des taches de lysats de
cellules entières, le blocage de 50 à 100% de
sérum peut être très efficace dans la réduction de
la liaison non spécifique.