Hoefer PR625 Immunoblot - Manuel (Page 10)

•
p8
Fuite – solution
d'anticorps a
déménagé dans les
canaux adjacents. Les zones sèches de la
membrane agir comme des
mèches pour les fluides dans
les zones adjacentes. Toujours pré-mouillée avant le montage de la
membrane dans l'unité.
Remplissez tous les canaux, couvrant la membrane
avec le tampon.
Membrane ne couvre pas
toute la longueur du canal. Veiller à ce que la membrane est coupé à la taille
appropriée.
Fluide dans les canaux
surchargés débordé lorsque
l'appareil a été secouée,
entraînant une pollution des
canaux adjacents. Ne surchargez pas les canaux.
Coussinets d'étanchéité
Re-utilisés ne sont pas
étanches. Ne pas réutiliser coussinets d'étanchéité comme
ils compriment lors de l'utilisation.
D'incubation du bac. Considérez votre incubation blot avec un anticorps
secondaire dans ImmunoBlot plutôt que d'incuba-
tion bac. (Voir l'annexe A:. Note 6.)
La membrane est dépouillé
de bloquer la protéine. S'il vous plaît prendre soin de ne pas dépouiller la
tache de bloquer la protéine tandis que le lavage
avant l'addition d'anticorps primaires. S'il vous
plaît suivez les instructions de votre kit de détec-
tion de Western blot. Un protocole échantillon est
donnée à l'Annexe B.
Canaux non lavées conte-
naient des anticorps qui a
contaminé l'expérience. Nettoyez l'appareil après chaque utilisation. Pour
le nettoyage des conseils, voir le Clean la section
ImmunoBlot, à la page 7.
Faible sensibilité Lorsque faible affinité ou
des anticorps à faible titre
sont utilisés à haute dilution
(1:100,000 ou plus), une
certaine diminution de
l'intensité du signal peut
être observé. Les anticorps
peuvent s'épuiser dans
le petit volume du canal
ImmunoBlot. Augmenter le pli 2-5 anticorps concentration.
Augmenter le volume de solution d’anticorps par
canal. Pour ce faire, insérer standards 200 µl
embouts de pipette en plastique dans les deux
ports d’entrée pour chaque canal. Ceux-ci servent
de réservoirs pour des volumes d’échantillons plus
grande que le volume du canal lui-même, tandis
incubation sur la bascule.
Injecter l’échantillon d’anticorps en utilisant une
astuce qui reste alors dans le port d’entrée et
devient un tel réservoir.
Effectuer incubations d’anticorps secondaires dans
un bac. (Voir l’annexe A, la note 6.)
Dépannage
problème causes possibles recommandations