Hoefer SE600X Chroma - Manuel (Page 25)

•
p17
Remarque: Une fois les
échantillons sont dans les
puits, prendre soin de ne
pas ébranler les sandwichs
de sorte que les échantillons
ne sont pas renversées ou
mélangé.
1
Préparer le puits
Retirer le peigne en secouant délicatement un côté
à côté et puis en le soulevant vers le haut pour
éviter d’endommager les parois du puits. Rincer
soigneusement chaque puits avec de l’eau distillée
pour enlever l’acrylamide non polymérisée et puis
les égoutter en inversant le sandwich de gel (ou
roulette). Remplir chaque puits avec du tampon
d’électrophorèse.
2
Préparer l’échantillon
Augmenter la densité échantillon de liquide avec
10% de glycérol ou de saccharose. Ajouter un
colorant de suivi telles que le rouge de phénol, bleu
de bromophénol, ou pyronine Y.
Pour les gels de protéines de la SDD, utilisez un
tampon de traitement 2X pour dénaturer les deux
échantillons liquides et secs dans un tube à essai.
Pour des solutions de protéines liquides, ajouter un
volume égal de tampon 2X.
Pour sécher les échantillons de protéines, ajouter des
volumes égaux de tampon d’échantillon 2X et de
haute pureté de l’eau pour atteindre la concentration
souhaitée.
3
Chauffer le tube dans l’eau bouillante pendant
90 secondes, puis laisser refroidir à température
ambiante. Échantillons traités peuvent être stockés à
-40 à -80 °C pour les courses futures.
Protéines membranaires de chaleur à 60 °C pendant
20 minutes. Conserver l’échantillon utilisé à 4 °C.
4
Sous-tend le échantillon dans les puits à l’aide d’une
microseringue pointe fine ou d’un gel de chargement
pointe de pipette.