Hoefer SE600X Chroma - Manuel (Page 20)

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Des gels d’acrylamide
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Préparer la solution de monomère et versez le gel
Préparer la quantité requise de solution de
monomère. Désaérer et ajouter l’initiateur et un
catalyseur juste avant la coulée du gel. Introduire à
la pipette la solution dans un coin du sandwich, en
prenant soin de ne pas introduire de bulles d’air. Voir
ci-dessous pour le niveau de la solution appropriée
en fonction de l’application.
Pas de gel d’empilement (système continu). Remplir
solution à juste en dessous de la partie supérieure
du bord de plaque supérieure. Si des bulles sont
emprisonnées, les retirer avec une pipette ou une
seringue. Mettre en place un peigne (avec un léger
angle) dans chaque sandwich, en prenant soin de ne
pas emprisonner des bulles d’air sous les dents.
Club sandwich. Pipeter la solution dans les deux
sandwichs, le remplissage de chaque au même
niveau en dessous du bord cranté.
Empilement de gel. Remplir solution à 3–4 cm en
dessous du haut de la plaque de verre. Cette hauteur
permet 1 cm de gel d’empilement ci-dessous les
puits. Verser le gel et appliquer une superposition
(voir étape 2). Après le gel est fixé, de préparer le gel
d’empilement comme décrit ci-dessous.
Électrophorèse 2-D (système de la protéine
discontinue). Remplir solution de monomère à
environ 1 cm en dessous du haut de la plaque de
verre pour permettre 4–5 mm pour la bande ou
de gel IPG tube et un joint d’agarose. (Un gel de
concentration, il faudra un espace supplémentaire).
Sceller la bande IPG ou de gel tube en place avec de
l’agarose dissous dans la gestion de mémoire tampon.
Prenez soin d’éviter le piégeage des bulles d’air entre
les gels de première et de deuxième dimension.
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Superposer chaque gel avec une mince couche d’eau-
butanol saturé d’eau, ou un tampon de gel dilué pour
empêcher l’exposition du gel à l’oxygène. Lentement