Hoefer TE42 - Manuel (Page 28)

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Transferts de protéines
Des résumés d’études
Gershoni et Palade (1982) ont analysé les facteurs
qui affectent la récupération des protéines à partir
des gels de SDS à la nitrocellulose ou de papier
DBM. Selon leurs conclusions, le méthanol dans
le système tampon Towbin est nécessaire pour
atteindre une fixation efficace sur de la nitrocel-
lulose. Le méthanol améliore obligatoire dans le
cadre en supprimant lié à une protéine SDS. En
l’absence de méthanol, marqué albumine de sérum
bovin (BSA) passe à travers au moins cinq couches
de membranes. Le méthanol peut entraîner un
gel à se rétrécir, cependant, de sorte que le taux
d’élution diminue. En utilisant une membrane
cationique (comme le nylon), qui lie les protéines
plus efficacement, et en omettant de méthanol à
partir du tampon de transfert, Gershoni et Palade
a obtenu un transfert beaucoup plus quantitative.
L’inconvénient de la membrane cationique, c’est
que les taches de protéines se lient également bien,
de sorte que l’arrière-plan coloration a tendance
à être très élevé. Correctement éteint, cependant,
ce document peut être utilisé pour la détection des
anticorps ou des méthodes de recouvrement autres
moyens d’identification des protéines. Un résumé
de type membrane et la concentration de méthanol
recommandée suit:
Le type de membrane Méthanol %
Nylon chargé 0
Nitrocellulose ≤ 20
PVDF ≤ 15
Certains travailleurs nous ont signalé qu’une faible
concentration de SDS (0,1%) améliore le transfert
de la protéine à partir d’un gel de SDS. Burnette
(1981) et Symington et al. (1981) ont étudié l’effet
du poids moléculaire de la protéine. Gibson (1981)
décrit une méthode pour augmenter le taux de
transfert des protéines de grande taille par clivage
limitée à la pronase pendant le transfert.