Hoefer TE42 - Manuel (Page 14)

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Monter la cassette de transfert
1
Pré-humide nitrocellulose ou des membranes de nylon
avec de l’eau distillée. Pré-humide PVDF ou d’autres
membranes hydrophobes dans le méthanol. Puis trem-
per tous les types de membranes dans un tampon de
transfert pendant 2-5 minutes.
2
Ouvrir la cassette en libérant les deux languettes de
verrouillage le long du bord opposé des charnières.
Placez la cassette ouvert dans un bac rempli d’au
moins 3 cm de tampon de transfert.
3
Assembler la pile de transfert afin que les molécules
vont migrer vers la membrane. Pour macromolécules
chargées négativement (comme les acides nucléiques
et la plupart des protéines), la construction de la pile
sur la moitié de gris de la cassette (puis plus tard,
positionner le couvercle de sorte que le côté gris fait
face le fil rouge, ou anode (+).
Placez une éponge en mousse 3 mm d’épaisseur sur
la cassette ouverte immergée et appuyez doucement
jusqu’à ce que tout l’air est expulsé. Placez une
feuille de papier buvard sur l’éponge, puis placer
la membrane sur le papier buvard. Placer le gel qui
contient un échantillon qui a été séparé par électro-
phorèse et on équilibre (si nécessaire) avec transfert
de tampon sur la membrane. Doucement rouler une
pipette de verre ou de tube à essai sur le gel pour
éliminer l’air emprisonné entre la membrane et le
gel. Couvrir le gel avec une feuille de papier buvard,
puis placez une éponge de la bonne épaisseur (voir le
schéma ci-dessous), à nouveau en appuyant légère-
ment pour expulser l’air emprisonné.
Remarque: Toujours porter des
gants lorsque vous manipulez des
membranes pour éviter d’avoir des
empreintes digitales sur eux.
Important! Prenez grand soin de
retirer toutes les bulles d’air à
chaque étape car la présence de
bulles d’air, en particulier entre la
membrane et le gel, le transfert
de blocs.