Hoefer TE42 - Manuel (Page 23)

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Dépannage
problème solution
Transfert incomplet
Des zones blanches sur Retirez toutes les poches d’air emprisonnées dans l’assemblage pile
la membrane transfert: assembler la pile alors qu’il est immergé dans un tampon
de transfert, appuyez doucement sur chaque éponge car il est ajouté
à la pile, et rouler une pipette en verre ou en tube à essai sur la
membrane et le gel pour éliminer toutes les bulles d’air.
Réduire la vitesse d’agitation pour éviter toute turbulence.
Processus seulement une bande ou d’une membrane dans chaque
bac ou cassette pour éviter les chevauchements.
Utilisation d’un tampon de force ionique inférieure.
La continuité électrode Check. Pendant le transfert, un flux continu
de gaz est libéré sur toute la longueur des électrodes. Si bulles ne
forment pas sur toute la longueur de l’électrode, l’électrode remplacer.
Si cassettes sont frottées à vide, la remplacer. Suremballage la
cassette provoque-il de courber, voir les instructions de montage
recommandées sur la page 6.
Motif de grille sur la membrane Ajouter des feuilles supplémentaires de papier buvard pour augmen-
ter l’espace entre le panneau de cassette et le gel. Prenez soin de ne
pas surcharger la cassette, le gel doit être tenue fermement et unifor-
mément entre les éponges, mais pas si bien qu’il est pressé.
Molécules ne migrent pas de gel Augmenter l’intensité du champ.
Augmenter la période de transfert. (Essayez de le doubler.)
Ne pas utiliser la coloration ou la fixation des agents sur le gel avant
le transfert.
Utilisez un diluant de gel.
Réduire la concentration d’acrylamide gel.
Arrivée ce que le pH du tampon est proche du pH voulu. La plupart
des tampons ne devrait pas être ajustée; faire tampon frais.
Utilisez 3,5 mM SDS (0,1%) dans le tampon de transfert.
Évitez y compris le méthanol dans le tampon de transfert ou de
réduire le montant à un minimum absolu.
Utilisez la qualité de réactifs chimiques.
Augmenter la durée de Southern blots sont dépuriné.
Augmenter la charge nette sur la protéine en changeant d’un tampon
de transfert avec un pH différent. Abaisser le pH (<6-7) augmente la
charge positive sur les protéines; pH plus élevé (>6-7) augmente la
charge négative sur les protéines.