Hoefer IEF100 - Manuel (Page 27)

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Préparation bandes IPG
Gels pH immobilisé (IPG) sont ultra minces sur des gels de polya-
crylamide films de support en plastique. Les gels sont réalisés avec un
gradient de pH lié de manière covalente dans la matrice de gel. Les
gels sont stables et reproductibles. Les gels sont fournis déshydratés et
doivent être conservés à des températures de -20 °C ou moins.
Les bandes IPG avoir un acide (+) et une fin de base (–) fin. Images de
gel 2D sont généralement représenté avec le côté acide sur la gauche,
et c’est l’orientation des bandes IPG dans le IEF100. L’électrode
appropriée doit être appliquée à chaque extrémité: anodique (+) à
l’extrémité d’électrode acide (gauche) et le cathodique (–) d’électrode
à l’extrémité de base (à droite).
Les bandes séchées nécessitent une réhydratation avant la course. En
règle générale, plusieurs réactifs différents sont inclus dans la solution
de réhydratation pour aider à solubiliser les protéines, et de permettre
succès isoélectrofocalisation. La réhydratation se fait généralement
à la température ambiante, ou 20 °C, et a besoin d’un minimum de
8 heures pour une bonne absorption de la solution reswelling. Il est
souvent plus pratique pour permettre la réhydratation de se produire
du jour au lendemain. Au cours de la réhydratation, les bandes IPG
sont couverts dans l’huile minérale pour prévenir la perte d’humidité,
et d’éviter la cristallisation d’urée.
Les bandes IPG sont réhydratés en utilisant l’un des plateaux de
réhydratation/équilibration fournies avec le IEF100. Échantillon de
protéine peut être ajouté à la bande IPG dans cette étape. Les bandes
IPG sont transférées à IEF100 pour focaliser.