Sonics VCX134 - Manuel (Page 22)

Toujours insérer la sonde suffisamment profondément en dessous de la surface de
l'échantillon pour éviter la formation d'aérosol ou de mousse, la mousse diminuant
considérablement la cavitation. Un traitement à une puissance plus faible sans mousse est
beaucoup plus efficace qu'un traitement à une puissance plus élevée avec mousse. La
diminution de la puissance, l'augmentation de la durée du processus et l'abaissement de la
température de l'échantillon empêchent généralement l'apparition d'aérosol et de mousse.
Ne pas utiliser d'agent anti-moussant ou de surfactant.
Des radicaux libres se forment pendant la cavitation. Si on laisse ces radicaux libres
s'accumuler, ceux-ci peuvent affecter de façon importante l'intégrité biologique de
l'échantillon en réagissant avec les protéines, les polysaccharides ou les acides
nucléiques. La formation de radicaux libres au cours de traitements de courte durée n'est
normalement pas considérée comme un problème. Pour des traitements prolongés, il peut
être bénéfique d'ajouter des fixateurs de radicaux libres comme le dioxyde de carbone,
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O, la cystéine, la glutathione réduite, le dithiothréitol ou d'autres composés SH. La
saturation de l'échantillon par une atmosphère protectrice d'hélium ou d'azote gazeux, ou
l'ajout d'un petit bout de glace carbonique dans l'échantillon diminue souvent la formation
de radicaux libres. Bien qu'il soit vrai qu'un gaz est nécessaire à une désintégration
cellulaire efficace, il n'est pas nécessaire que la phase vapeur soit constituée d'oxygène ou
d'air car n'importe quel gaz, à l'exception du dioxyde de carbone, marche aussi bien.
Différentes méthodes peuvent être utilisées pour mesurer l'efficacité de la désintégration.
Par exemple, un comptage visuel peut être fait sous microscope.
Pour une meilleure précision, il est possible d'effectuer un dosage des protéines. Cette
procédure est largement reconnue comme étant une bonne méthode de mesure de la
désintégration cellulaire en tenant compte de la quantité de protéine libérée après
désintégration. Les cellules désintégrées sont ensuite testées et vérifiées en fonction de ce
nombre pour obtenir le pourcentage de cassure.
Il existe plusieurs types de dosages des protéines. Un communément utilisé est la
méthode de la réaction de Folin (dosage de Lowry), car il est comparativement simple et
donne des résultats cohérents.
Cette méthode colorimétrique développe une sensibilité pour les protéines d'environ 8
µg
/ mL dans la solution dosée.
Ce dosage vire au bleu en présence de protéines suite à la réaction des ions cuivre dans la
solution alcaline avec les protéines et la réduction du phosphomolybdate - acide
phosphotungstique dans le réactif de Folin par les acides aminés aromatiques présents
dans la protéine traitée.
La fraction protéique libérée, Rp, est calculée à l'aide de l'équation suivante et en
multipliant le résultat par 100 :
Rp = Cf – Cb
Ct – Cb
Cf = Protéines libres
Ct = Protéines totales
Cb = Protéines de fond
Ceci donne le pourcentage de désintégration réelle, en tenant compte des niveaux de fond
en protéines avant la désintégration.
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