Iris Sample Processing StatSpin® CytoFuge 12 Versatile Cytocentrifuge System - Manuel (Page 11)

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Section
3
Caractéristiques et préparation des
échantillons
Présentation
La concentration cellulaire approximative de l’échantillon doit être établie préalablement à la préparation
de la lame sur le système Cytofuge 12. Les échantillons contenant une concentration cellulaire
supérieure à la quantité optimale produiront des lames avec des cellules trop condensées ou
superposées les unes aux autres. Les échantillons contenant une concentration cellulaire trop faible
produiront des lames avec des cellules difficiles à localiser, compter ou examiner. Le tableau suivant
fournit une indication générale de la con
centration d’échantillon optimale, sur la base d’un diamètre
cellulaire moyen de 10 µm.
Concentration de l’échantillon Recommandation
500 à 1500 cellules/µl* Utiliser l’échantillon tel quel.
< 500 cellules/µl Préconcentrer l’échantillon
> 1500 cellules/µl Diluer l’échantillon
* Dans des échantillons connus pour leur faible population cellulaire (LCR notamment), une concentration
de 50 à 100 cellules/µl produira des résultats acceptables.
MISE EN GARDE – Des précautions universelles doivent être observées pour tous les échantillons
biologiques, qu’ils contiennent ou non un agent infectieux. Les joints biologiques ne suffisent pas à
protéger contre la contamination par des pathogènes. Toujours charger et décharger le rotor dans
une hotte de sécurité biologique (cf. références).
Volumes d’échantillon
Suivez les recommandations suivantes pour déterminer les volumes d’échantillon dans chacun des
concentrateurs Cytofuge.
Plage de volume max. Plage de volume optimale
Concentrateur filtrant 50 à 300 µl 100 à 300 µl
Concentrateur cellulaire à un puits 300 à 1600 µl 400 à 800 µl
Concentrateur cellulaire à trois puits 50 à 400 µl 100 à 200 µl
Préconcentration
Pour des résultats optimaux, les échantillons caractérisés par une faible population cellulaire doivent être
préconcentrés.
Par exemple, si l’échantillon initial contient environ 100 cellules/µl, une préconcentration
x10 fournira 1000 cellules/µl, valeur située dans la plage recommandée pour le système Cytofuge 12.
Procédure de préconcentration
1. Transférez 10 ml de l’échantillon dans un tube de centrifugation conique en polypropylène.
2. Centrifugez l’échantillon à 1000 – 1500 xg pendant 10 à 15 minutes dans une centrifugeuse
conventionnelle.
3. Décantez 9 ml de surnageant acellulaire.
4. Mélangez le culot cellulaire et le surnageant restant au vortex ou en agitant le tube.
5. Pipetez le volume adéquat d'échantillon concentré dans les concentrateurs du système Cytofuge.
Dilution
Pour des résultats optimaux, diluez les échantillons à haute densité cellulaire. Dans la plupart des
applications, une solution saline tamponnée ou un milieu de culture tissulaire standard (solution saline
équilibrée de Gey) peut être utilisé(e) comme diluant.
L’ajout d’une ou deux gouttes d'albumine de sérum
bovin (ASB) favorise l’adhérence des cellules à la lame porte-objet.