Eppendorf Multiporator - Manuel (Page 22)

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4.8.7 Nettoyage et désinfection de la chambre de fusion hélicoïdale
Immédiatement après chaque essai, il convient de bien rincer la cuve et
le noyau de la chambre de fusion hélicoïdale à l'aide d'eau distillée pour
éviter l'incrustation de dépôts secs.
Lorsque les pièces se trouvent fortement souillées, on peut les
décontaminer brièvement dans un bain à ultrasons (avec ajout éventuel
d'un détergent tel que l'Edisonite Super), ou les brosser délicatement
avec une brossette (brosse à dents) douce. Dans la technique du
brossage, toujours aller dans le sens des spirales, sous peine de déplacer
les fils d'électrodes et de rendre ainsi la chambre de fusion hélicoïdale
inutilisable.
L'étape suivante consiste à désinfecter les pièces à l'aide d'alcool
éthylique non dénaturé à 70 %. Le gobelet est rempli pour cela avec
250 µl d’éthanol et le noyau est vissé dans le gobelet. Au bout de
10 secondes , le noyau est enlevé en le dévissant puis l’alcool est vidé.
Laisser ensuite sécher le récipient et le noyau dans des conditions
stériles à l’abri de la poussière. Après séchage, la chambre de fusion
hélicoïdale est à nouveau prête à l'emploi.
4.8.8 Tampon pour l’électrofusion des cellules d’eucaryotes
La solution d’électrofusion (tampon de fusion) est d’une importance
essentielle pour le taux de survie des cellules et pour l’obtention réussie
de cellules hybrides. Pour tout le processus de l’électrofusion
(alignement, fusion, post-alignement), on ne doit utiliser qu’un seul
tampon afin d’éviter tout énervement supplémentaire aux cellules.
Les tampons de fusion d’Eppendorf se distinguent par des conductibilités
plus faibles et par des osmolarités plus petites par rapport aux solutions
de fusion utilisées de manière habituelle. La faible conductibilité
(120 µS/cm) des tampons Eppendorf permet de créer des densités de
champ relativement faibles (tensions) lors de la fusion des cellules.
De manière idéale, l’électrofusion doit s’effectuer dans des tampons
hypoosmolaires. En passant à travers le système de tampon hypo-
osmolaire, les cellules absorbent de l’eau brièvement avant l’impulsion et
gonflent en conséquence. La protéine cytosquelette et à membrane sont
dissoutes temporairement et la fusion dans le champ électrique est
facilitée. Les rendements des produits de fusion peuvent alors, en
comparaison avec les expériences faites dans des conditions hypo-
osmolaires, être considérablement augmentés. Avec les cellules, qui
réagissent sensiblement aux conditions purement hypoosmolaires, il est
possible d’obtenir l’osmolarité nécessaire en ajoutant peu à peu le
tampon d’électroporation isoosmolaire.
La stérilité de ces tampons d’électroporation (hypo- et isoosmolaire) doit
être testé ainsi que l’absence de mycoplasmes et d’endotoxines.
4 Descriptif de l'appareil
Multiporator_Text_fr.fm Seite 108 Freitag, 9. Juni 2006 8:07 08