Eppendorf Multiporator - Manuel (Page 16)

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4.7.2 Tampon pour l’électroporation des cellules d’eucaryotes
Pour obtenir des résultats optimaux de transfection, seuls les tampons
d’électroporation d’origine d’Eppendorf, avec une faible conductivité
électrique, doivent être utilisés. La stérilité de ces tampons
d’électroporation (hypo- et isoosmolaire) doit être testé ainsi que
l’absence de mycoplasmes et d’endotoxines.
En utilisant ces systèmes de tampon, beaucoup moins de courant passe
au cours de l’électroporation, ce qui permet d’éviter des détériorations
considérables de cellules. Dans le même temps, grâce à l’utilisation de
solutions tampons correspondantes, on réussit à obtenir que les "pores"
induits électriquement soient beaucoup plus grands qu’avec les
applications pulsées dans des solutions conductrices.
De manière idéale, l’électroporation doit s’effectuer dans des tampons
hypoosmolaires. En passant à travers le système de tampon
hypoosmolaire, les cellules absorbent de l’eau brièvement avant
l’impulsion et gonflent en conséquence. Ce processus a lieu en raison de
différents effets, par ex. la réduction de la tension de passage, une
perméabilisation facilitée de la membrane plasma.
Les rendements peuvent alors, en comparaison avec les expériences
faites dans des conditions hypoosmolaires, être considérablement
augmentés. Avec les cellules, qui réagissent sensiblement aux conditions
purement hypoosmolaires, il est possible d’obtenir l’osmolarité nécessaire
en ajoutant peu à peu le tampon d’électroporation isoosmolaire.
Le tampon d’électroporation Eppendorf doit être utilisé pour
l’électroporation des cellules d’eucaryotes (à l’exception des levures, de
certains microorganismes et des plantes). Pour l’électroporation des
bactéries, levures et autres microorganismes, des solutions
d’électroporation avec une conductibilité plus faible, peuvent être
utilisées. De plus amples détails sur les protocoles d’application peuvent
être obtenus sur la page d’accueil d’Eppendorf à l’adresse
www.eppendorf.com.
4 Descriptif de l'appareil
Multiporator_Text_fr.fm Seite 102 Freitag, 9. Juni 2006 8:07 08