Hoefer DQ300 - Manuel (Page 24)

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4.2 Gamme linéaire et extinction
La plage linéaire est la gamme de concentration
dans lequel la lecture de la DQ300 est directement
proportionnelle à la concentration du fluorophore.
La plage linéaire commence avec la plus petite
concentration détectable et s’étend jusqu’à une
limite supérieure (concentration) qui dépend des
propriétés du matériau fluorescent, les filtres utilisés,
et la longueur du trajet. Voir le schéma ci-dessous.
Une relation non linéaire est observée à des
concentrations plus élevées lorsque le signal de
fluorescence augmente plus lentement que la
variation de concentration. A des concentrations
encore plus élevées, des lectures vont commencer
à diminuer même si les concentrations des échan-
tillons sont en augmentation. Cet effet est connu
sous le nom “d’extinction du signal.”
La linéarité peut être vérifiée en diluant un échan-
tillon ou 1:1 certaine autre rapport pratique
(assurez-vous d’utiliser un espace approprié pour
les dilutions). Si l’échantillon est dans la plage liné-
aire, la lecture diminue en proportion directe de la
dilution. Si la lecture ne diminue pas en propor-
tion directe de la dilution ou une augmentation de
la lecture, l’échantillon est au-delà de la gamme
linéaire de votre fluorophore.
TBS-380 User’s Manual 15
A nonlinear relationship is seen at higher
concentrations where the fluorescence signal
increases slower than the change in concentration.
At even higher concentrations, readings will begin
to decrease even though the sample concentrations
are increasing. This effect is known as "signal
quenching."
Linearity may be checked by diluting a sample 1:1
or some other convenient ratio (be sure to use an
appropriate blank for the dilutions). If the sample
is within the linear range, the reading will
decrease in direct proportion to the dilution. If the
reading does not decrease in direct proportion to
the dilution or if the reading increases, the sample
is beyond the linear range of your fluorophore.
4.3 Temperature Considerations
Fluorescence is temperature sensitive. As the
temperature of the sample increases, the
fluorescence decreases. For greatest accuracy,
0
1
2
3
4
5
6
7
0 2 4 6 8 10 12
Fluorophore conc.
R
el
at
iv
e
Fl
uo
re
sc
en
ce
U
ni
t
t
Unité
de
fluorescence
relative
Concentration de fluorophores